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討論串[問題] 請問ligation的一些問題
共 9 篇文章
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※ 引述《dreamlife.bbs@bbs.sa.ncyu.edu.tw (我是廢渣)》之銘言：. 如果你認為一開始的DNA濃度就有錯誤. 那也不能從最後的結果就認為效率不好. 假設一開始有180ug的DNA 絕對不可能以0.5ul的enzyme切好. 我自己切20ug 20U/ul的限制酵素就要
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※ 引述《pwl.bbs@ptt.cc (蓄勢待發)》之銘言：. > ───────────────────────────────────────> 我覺得你的做法好像怪怪的. > : f大大. > : 可否請教一下您家都用什麼方式純化嗎. > : 因為我們家 都亂用 大家都覺得純化效率很差. >
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我覺得你的做法好像怪怪的. 這個DNA的量真的很多耶...總共有180ug呀.... 那麼你是使用多少酵素去切呢. 如果是NEB的EcoRI的話1ul是20U(印象中). 那麼需使用9ul的酵素???通常膠體純化不會溶於這麼多水阿. 為了讓DNA的濃度提高. 大概只會用30ul的水DNA有兩種定量方
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> : 你的insert太大了 理論上本來就不可能接的起來. > : 一般來說 只要超過vector大小1/3的insert都太大 但也許有高手覺得沒差(汗). > : 在ligation過程中insert跟vector很難去碰撞到並且起反應. > 其實vector/insert都是DNA 當ins
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