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作者 icheee 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共50則

限定看板：Biotech

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[求救] 計算終濃度

[ Biotech ]6 留言, 推噓總分: +2

作者: Lilfroggie - 發表於 2017/05/29 21:55(8年前)

4^F推icheee: 10 (x) x 2.5 (uL) / 25 (uL) = 1 (x)05/30 17:36

5^F→icheee: 質量平衡則 C1 x V1 = C2 x V2 移項之後的結果05/30 17:38

[求救] re-ligation的問題

[ Biotech ]28 留言, 推噓總分: +2

作者: kaofei - 發表於 2017/05/29 17:46(8年前)

11^F→icheee: 同上 blence 大大 overhang 在 per cleanup 應該穩定而因05/30 17:39

12^F→icheee: 為已經有 cleanup 所以不需要事先 inactivate ligase05/30 17:40

[求救] coomassie blue band 反白

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +2

作者: tina62119 - 發表於 2017/05/03 10:00(8年前)

7^F推icheee: 確實是有那種商品 simply blue 是用水退染即可05/03 18:18

Re: [求救] NRK52E West Blot actin飆高問題

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +2

作者: Ianthegood - 發表於 2017/05/02 01:55(8年前)

1^F推icheee: 推認真回XD 但我猜他說 housekeeping gene 的表現跟代數有05/02 05:25

2^F→icheee: 相關, 應該是建立在收同樣多細胞數的情況下... (應該啦..05/02 05:26

[求救] 蛋白純化解凍後出現沉澱

[ Biotech ]43 留言, 推噓總分: +12

作者: migu0531 - 發表於 2017/05/01 22:14(8年前)

14^F推icheee: 推 Invec 高 imidazole 不要凍... 而且一般凍會作 flash05/02 05:15

15^F→icheee: freezing 吧? 你說直接放 -20C 有經過 flash freezing 嗎?05/02 05:16

22^F推icheee: Amicon/dialysis/ultrafiltration/desalting column05/02 07:36

23^F→icheee: Akta desalting column 連 280 吸收都看不到嗎？之前也有05/02 07:37

24^F→icheee: 用過 pd-10 這種 open column 還算省事05/02 07:38

28^F推icheee: 是第一次純化的蛋白？目標 buffer 是有文獻參考或繼承別人05/02 13:29

29^F→icheee: 的 protocol?05/02 13:30

30^F推icheee: 全新 protein 可能 buffer condition 要多試試 (這是在假05/02 13:34

31^F→icheee: 設你表達的條件/nickel column 純化條件都沒問題的狀況下)05/02 13:35

32^F推icheee: 另外關於溫度, 確實有些蛋白在室溫可能還比4度/-20度穩定05/02 13:37

33^F→icheee: 這就要自己試; 回到凍的方式, 一般我是都丟液氮 flash05/02 13:38

34^F→icheee: freezing, 避免 cold denaturation05/02 13:39

35^F→icheee: 然後存 -8005/02 13:39

41^F→icheee: 10x buffer 低溫可能鹽析出而已05/02 22:14

[求救] 大腸桿菌表達問題

[ Biotech ]13 留言, 推噓總分: +2

作者: s992003 - 發表於 2017/05/01 18:11(8年前)

6^F→icheee: 聽起來是本來想要透過測活性來看有沒有 inclusion body05/02 05:35

7^F→icheee: 但是沒有測活性的 assay 所以想要用其他方式判斷是否產生05/02 05:36

8^F→icheee: inclusion body?05/02 05:36

9^F推icheee: 測表達條件我會離心分 supernatant 跟 pellet 然後跑膠看05/02 13:44

10^F→icheee: 看 induction 有沒有成功並看是不是 soluble05/02 13:46

11^F→icheee: （不過很久沒表達/純化蛋白了，有錯請大家指正>< ）05/02 13:47

Re: [求救] WB strip strip可信度

[ Biotech ]23 留言, 推噓總分: +6

作者: aaaazzzz - 發表於 2017/04/28 17:29(8年前)

17^F推icheee: 之前有機會用LICOR家的系統來試 stripping 的效率真的不04/30 07:00

18^F→icheee: 是很好洗乾淨04/30 07:01

[求救]Bradford定量法求助

[ Biotech ]23 留言, 推噓總分: +8

作者: knowledge265 - 發表於 2017/03/28 00:53(8年前)

4^F推icheee: 看了一下覺得跟我看過/做過的方式不同... 一般不是都把03/28 08:26

5^F→icheee: BSA 標準品作為限量試劑, 然後用相同量 (過量) 的 Bradf-03/28 08:27

6^F→icheee: ord reagent 去反應嗎?03/28 08:27

9^F推icheee: 這條檢量線看起來比較像在做 Bradford reagent conc. 的檢03/28 10:18

10^F→icheee: 量線...03/28 10:18

13^F推icheee: 如 q 大所說, 一般作法是固定 reagent 的量 + 固定 sample03/28 11:31

14^F→icheee: 的量 (指體積). 所以假設 Bradford sol'n 都用 500 uL, 樣03/28 11:31

15^F→icheee: 品/標準品都用 20 uL (體積不足用水或溶解/稀釋 BSA 的溶03/28 11:33

16^F→icheee: 劑補). 這樣再回來看, 應該你的問題就可以解決了.03/28 11:34

17^F→icheee: 至於如果硬要用你現在的步驟來看, 你測得的 24.08 是 ug/03/28 11:35

18^F→icheee: mL. 按你的目的是該把稀釋倍率考慮進去 (*500), 推回原本03/28 11:36

19^F→icheee: 的濃度. (要用 ug/mL 或 mg/mL 表示就看你認為怎樣恰當)03/28 11:37

22^F推icheee: 不行吧我只是直接回答你問題04/01 05:44

[求救] imagej 在彩色圖片中對單獨顏色進行調整

[ Biotech ]3 留言, 推噓總分: +2

作者: yaboo - 發表於 2017/01/25 18:07(9年前)

3^F推icheee: 匯入 imagej 時候可以選擇 split channels ?01/27 05:30

[求救] WesternBlot的Band結果判讀?!

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +2

作者: geltukou - 發表於 2016/12/21 10:42(9年前)

9^F推icheee: 你的系統裡是看 endogenous 的嗎？或是 fusion protein?12/24 03:37

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