作者查詢 / GG810424

總覽項目：發文 | 留言 | 暱稱

作者 GG810424 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共73則

限定看板：Biotech

看板排序：

全部Biotech73WomenTalk57Gossiping42Boy-Girl36LoL10movie5sinica5joke4Bio-Job3Nangang3Baseball2TOEIC2Bioindustry1japanavgirls1<< 收起看板(14)

首頁

尾頁

[求救] Recombinant protein不表現了

[ Biotech ]34 留言, 推噓總分: +7

作者: yayayoyi - 發表於 2019/04/28 23:49(5年前)

15^F→GG810424: 先檢查有無表現，再看是在pellet還是supernant，有表現05/01 01:23

16^F→GG810424: 表示IPTG無問題。05/01 01:23

17^F→GG810424: 降低induction 濃度至0.2mM IPTG05/01 01:24

18^F→GG810424: 時間調整至16度C 14-16小時05/01 01:24

19^F→GG810424: 破菌盡量用French pressure05/01 01:25

20^F→GG810424: 基本上只要有表現，後續各種purify 方法都能得到蛋白，05/01 01:27

21^F→GG810424: 像是用Urea 破inclusion body，先Denature 再refolding05/01 01:27

22^F推GG810424: IPTG: 0.2*238.31*0.01=0.476g05/01 01:30

23^F→GG810424: 溶在10ml ddH2O,過0.22 micrometer filter05/01 01:31

24^F→GG810424: Stock 0.2M , working 1000倍稀釋成0.2mM05/01 01:32

25^F→GG810424: 若這樣做還有問題歡迎站內信洽詢，能幫的都會盡量幫。05/01 01:33

26^F→GG810424: 記得要Re-transform 到BL-21 (DE3) ;DH5a是用來萃取plas05/01 01:36

27^F→GG810424: mid DNA不能表現蛋白質05/01 01:36

28^F→GG810424: 還有解凍的菌液很容易跑到inclusion body05/01 01:37

29^F→GG810424: 盡量每次要純化蛋白都要重新re-transformation05/01 01:38

30^F→GG810424: 要把純化蛋白的過程，做的像製程一樣穩定。每一個環節05/01 01:39

31^F→GG810424: 都趨近於100%一樣。05/01 01:39

32^F→GG810424: 這樣純化出來的蛋白，不同的Batch才會Quality control05/01 01:40

33^F→GG810424: 很穩定。05/01 01:40

[討論]不太懂 RNA pull down assay

[ Biotech ]15 留言, 推噓總分: +3

作者: shofu0913 - 發表於 2019/04/14 22:19(5年前)

1^F→GG810424: 您的理解要從兩面向思考您會更清楚，RNA 已知，形成RNA04/15 02:19

2^F→GG810424: protein complex. 怎麼找未知protein ？MS Protein ID04/15 02:19

3^F→GG810424: Protein 用已知的，然後將Protein RNA complex 抓下來，04/15 02:23

4^F→GG810424: coat on beads ，然後去把RNA序列解出來，但是未知的RNA04/15 02:23

5^F→GG810424: 要怎麼定序，這就不清楚了，沒有primer 的序列無法放大04/15 02:23

6^F→GG810424: 那個未知的片段。04/15 02:23

[求救] 收anaphase的細胞

[ Biotech ]15 留言, 推噓總分: +1

作者: ai760721 - 發表於 2018/10/08 16:25(5年前)

13^F推GG810424: 建議先讓細胞同步（synchronize)，算好時間週期，染DAPI10/17 02:49

14^F→GG810424: 同時請記得也染anaphase 的marker 證明你收到的是anapha10/17 02:49

15^F→GG810424: se 的細胞。10/17 02:49

[求救] 看不懂paper中的分析方法(MI)

[ Biotech ]32 留言, 推噓總分: +2

作者: kikko1805 - 發表於 2018/10/14 17:09(5年前)

28^F推GG810424: 你可以直接寄信問作者，通常都會願意回，除非不是他做10/17 02:46

29^F→GG810424: 的。不願意不是太忙就是極大可能他心裡有鬼，又或是他10/17 02:46

30^F→GG810424: 表達的不夠清楚，審理的人也看不懂就讓他過了。10/17 02:46

[求救] 想請問mmp-9 在Western 的實驗

[ Biotech ]40 留言, 推噓總分: +10

作者: jacky255257 - 發表於 2017/01/06 11:04(7年前)

2^F推GG810424: Total protein 你下多少ug01/06 13:01

3^F→GG810424: 你有positive control cell lysate 嗎？01/06 13:02

7^F推GG810424: 你google MMP-9 antibody 看到 U937的那張圖，想辦法弄01/06 18:03

8^F→GG810424: 個positive control01/06 18:03

9^F→GG810424: 你membrane 是什麼材質的?01/06 18:03

10^F→GG810424: 你transfer 多久什麼電壓還有電流？01/06 18:04

11^F→GG810424: 做幾%的gel01/06 18:04

12^F→GG810424: 厚度？01/06 18:04

13^F→GG810424: 抗體titer怎麼下？01/06 18:05

14^F→GG810424: 你有問題可以加我FB : Tong Yu Hu01/06 18:05

15^F→GG810424: 我可以幫你一層一層剖析問題01/06 18:05

18^F推GG810424: 我從來沒有買過MMP-9 antibody 唷01/07 00:30

19^F→GG810424: 實驗不用做我也能判斷抗體的好壞01/07 00:31

20^F→GG810424: 我碩班用過200支以上抗體，這是經驗，你可以買abcam 的01/07 00:32

21^F→GG810424: 而且我沒有必要告訴你答案，我告訴你答案，永遠都學不會01/07 00:33

22^F→GG810424: ，我是啟發式教學01/07 00:33

[求救] 求Pichia expression positive control

[ Biotech ]4 留言, 推噓總分: +1

作者: dfast - 發表於 2017/01/04 10:25(7年前)

1^F推GG810424: 你的介紹太少了，看不懂，你這東西不常見捏01/04 12:57

2^F→GG810424: 資訊不對等很難幫助你01/04 12:58

[討論] 分離細胞核與細胞質的蛋白質試劑

[ Biotech ]13 留言, 推噓總分: +8

作者: honey823 - 發表於 2016/12/28 15:17(7年前)

9^F推GG810424: 可以自己配。 by G葛格的生命科學小教室12/29 23:47

[求救] ATP 可以放多久？

[ Biotech ]11 留言, 推噓總分: +1

作者: ad1980 - 發表於 2016/12/22 06:18(7年前)

1^F推GG810424: 我們放-80 ，15年了還有work，我主要是做ATP dependent12/22 10:32

2^F→GG810424: reaction in vitro12/22 10:32

3^F→GG810424: 配好的溶液，不是power12/22 10:33

[求救] flow 對照組雙染偏右消失

[ Biotech ]16 留言, 推噓總分: +6

作者: eccman - 發表於 2016/12/21 20:22(7年前)

13^F推GG810424: 0227899060有問題可以打過來問12/22 11:34

[求救] WesternBlot的Band結果判讀?!

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +2

作者: geltukou - 發表於 2016/12/21 10:42(7年前)

3^F推GG810424: 有問題請去fb搜尋（G葛格的生命科學小教室）詢問，WB真12/21 17:00

4^F→GG810424: 的需要多練習與經驗12/21 17:00

首頁

尾頁