[求救] flow 對照組雙染偏右消失

看板Biotech作者時間7年前 (2016/12/21 20:22), 7年前編輯推噓6(6推 0噓 10→)
留言16則, 6人參與, 最新討論串1/1
大家好 最近做細胞凋亡的Flow遇到一個問題 準備用來調十字線跟電壓還有補償的有下面四管: 1.不染不加藥細胞 2.雙染不加藥細胞 3.陽性對照單染PI 4.陽性單染annexin v 步驟為 1.上不染不加藥的陰性對照 將細胞群落調整在左下角十的一次方內 2.上單染PI及AV調整營光補償 目前為止都沒有問題 3.上雙染不加藥的細胞，這裡遇到一個大問題，整個細胞群或落在十字線的右邊 也就是右下象限，細胞群落這個往右偏很多，不知道以哪個要以哪個為基準劃十字 目前想到的問題出在上樣品時，沒有將上樣管洗乾淨，導致樣品間互相影響結果， 但做了很多次都是一樣的結果，附上DATA 不染不加藥細胞 http://imgur.com/OINq3Qo
雙染不加藥細胞 http://imgur.com/CYV1GpM
單染AV http://imgur.com/kfezTBi
單染PI http://imgur.com/TEgc9W8
雙染positive http://imgur.com/EKo28LP
麻煩各位高手了~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.231.245.22 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1482322969.A.62F.html
推
12/21 21:03, , 1F
單染圖要不要也放一下
12/21 21:03, 1F
※ 編輯: eccman (61.231.245.22), 12/21/2016 21:21:46
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12/21 21:22, , 2F
已補上單染 謝謝
12/21 21:22, 2F
推
12/21 21:29, , 3F
有沒試看看染isotype control?
12/21 21:29, 3F
※ 編輯: eccman (61.231.245.22), 12/21/2016 21:36:00
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12/21 21:36, , 4F
沒有 請問AV和PI的同型對照是?
12/21 21:36, 4F
推
12/21 23:19, , 5F
ssc 是否調強一點，讓細胞落在中間，確實分開凋亡的碎片
12/21 23:19, 5F
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12/21 23:19, , 6F
跟有兩個黏在一起的，然後只圈中間主要細胞群。
12/21 23:19, 6F
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12/21 23:22, , 7F
3樓是說AV 的 isotype IgG 或IgM嗎？
12/21 23:22, 7F
推
12/22 08:42, , 8F
看完全部圖 如果是我十字會畫AV(直)約10^1~10^2中間 PI(
12/22 08:42, 8F
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12/22 08:42, , 9F
橫)畫在約10^2 然後你問說為何雙染未加藥細胞會AV染上很
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多 我的經驗是操作時要對細胞很溫柔 用1ml tip吸都可能會
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造成細胞膜受損而染上AV (所以實驗都作不出差異...淚)給你
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12/22 08:42, , 12F
參考
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推
12/22 11:34, , 13F
0227899060有問題可以打過來問
12/22 11:34, 13F
推
01/02 09:56, , 14F
有算細胞數嗎 你單染AV跟雙染AV背景就不同
01/02 09:56, 14F
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01/03 16:47, , 15F
有算 但h2o2處理是一個well平均分成三管做單染和雙染 其他
01/03 16:47, 15F
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01/03 16:47, , 16F
都是一樣的細胞數
01/03 16:47, 16F
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