[求救] 想請問mmp-9 在Western 的實驗

看板Biotech作者 (jacky)時間7年前 (2017/01/06 11:04), 編輯推噓10(10推 0噓 30→)
留言40則, 10人參與, 最新討論串1/1
各位大大好 小弟已經試了好久 在du145的細胞中 跑western 看 mmp9的表現 可是不同家的抗體似乎抓起來效果都很難抓的感覺 不是沒有band 不然就非常非常弱 不然就很雜 不知道有沒有大大指點..... 謝謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.91.114 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1483671840.A.C37.html
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有沒有考慮做RNA或是gelatin assay(看活性的)
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推
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Total protein 你下多少ug
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你有positive control cell lysate 嗎？
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我下了80ug. 沒有control
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目前還不會弄到RNA跟其他的方法
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印象中MMP9的western不好做，也有可能是因為分泌出去了
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推
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你google MMP-9 antibody 看到 U937的那張圖，想辦法弄
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個positive control
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你membrane 是什麼材質的?
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你transfer 多久 什麼電壓 還有電流？
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做幾%的gel
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厚度？
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抗體titer怎麼下？
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你有問題可以加我FB : Tong Yu Hu
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我可以幫你一層一層剖析問題
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推
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mmp只有幾個可以做WB
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都能把MMP9講出來了,卻不順便講是試過哪些不好用
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推
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我從來沒有買過MMP-9 antibody 唷
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實驗不用做我也能判斷抗體的好壞
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我碩班用過200支以上抗體，這是經驗，你可以買abcam 的
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而且我沒有必要告訴你答案，我告訴你答案，永遠都學不會
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，我是啟發式教學
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我在說原po啦
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有些人不說基因,是不希望透露研究主題,但目前的沒這顧慮
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Abcam的抗體倒不是我的首選，使用經驗不佳
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推
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我也不愛 abcam…偏貴
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Abcam太多OEM,同一支貨,賣價必然貴一些,整併後的thermo
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也在學;不過上面abcam說的兔單株EPR吧? 是併epitomics來的
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算是自產,品質比較穩定,價格也不貴,應該可以獨立出來評價
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推
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不知道genetex跟 cell signaling的抗體好嗎?
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推
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如果沒有一定要定量,推做活性測試(gelatin assay)隨便查
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paper都有實驗方法
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推
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我也推gelatin assay; 但如果真要定量還是要有抗體阿
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～
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另外抗體購買還是看 citeab或 biocompare比較穩;大廠
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某些抗體就是特別難用，所以直接找前人引用較安全
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啟發式教學是啥鬼= =
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推
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MMP 這種東西跑western 和 gelatin assay 定義是不一樣
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的哦！要看您問什麼問題！
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推
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測量也可以用elisa試試看
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