[求救] 收anaphase的細胞

看板Biotech作者 (~方吉~)時間5年前 (2018/10/08 16:25), 編輯推噓1(1推 0噓 14→)
留言15則, 5人參與, 5年前最新討論串1/1
各位前輩好 小弟目前在做跟細胞核染色體有關的實驗 老闆前陣子要求要看細胞核在mitosis的過程會不會產生異常 主要是在MEF上將某個基因knock-out之後 將細胞種在蓋玻片上 (有用poly-L-Lysine coating過) 然後隔天直接固定染DAPI 但是我怎麼收一整個蓋玻片上都只有少數幾顆在anaphase 因為老闆說至少要算到幾百顆 所以想上來請教一下各位前輩 如何收到較多的anaphase的細胞呢? 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.125.32 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1538987140.A.3CE.html
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10/08 20:07, 5年前 , 1F
用 inhibitor 把細胞停在特定時期。如果怕 inhibitor
10/08 20:07, 1F
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10/08 20:08, 5年前 , 2F
會直接影響分裂造成實驗上的問題，就試試先把細胞同步
10/08 20:08, 2F
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10/08 20:09, 5年前 , 3F
在 S 或是 G2 phase，理論上到時應該會有大量細胞同時
10/08 20:09, 3F
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10/08 20:09, 5年前 , 4F
進 anaphase
10/08 20:09, 4F
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10/09 11:37, 5年前 , 5F
KO的比例也許沒有預期的高
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10/09 11:38, 5年前 , 6F
看你實驗的控制組怎麼設計來判讀結果
10/09 11:38, 6F
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10/09 16:48, 5年前 , 7F
KO的部分是有做過IF跟western確認過應該沒問題，然後細
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10/09 16:48, 5年前 , 8F
胞本身分裂週期大概是30小時，老師的意思應該是就算是沒
10/09 16:48, 8F
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10/09 16:48, 5年前 , 9F
有KO的細胞應該也要收的到幾百顆anaphase
10/09 16:48, 9F
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10/09 17:12, 5年前 , 10F
"沒有KO的細胞應該也要收的到幾百顆anaphase"
10/09 17:12, 10F
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10/09 17:13, 5年前 , 11F
看起來這老師不喜歡synchronize...照比例應該要觀察上萬顆
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10/09 17:13, 5年前 , 12F
才能湊到幾百顆anaphase細胞
10/09 17:13, 12F
推
10/17 02:49, 5年前 , 13F
建議先讓細胞同步（synchronize)，算好時間週期，染DAPI
10/17 02:49, 13F
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10/17 02:49, 5年前 , 14F
同時請記得也染anaphase 的marker 證明你收到的是anapha
10/17 02:49, 14F
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10/17 02:49, 5年前 , 15F
se 的細胞。
10/17 02:49, 15F
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