Re: 請問點TLC片的時候
感謝大家的幫忙 終於有分離出來了><
關鍵應該就是在於我的packing液和elute液極性改變太大吧
一但產生龜裂 就會使Gel下沉 並且堆積的樣子
所以我的第一個compound會堆在洞口 第二個compound會逼近
然後壓力累積到一個程度(?) Gel會一次流出來
這時候 第一個和第二個已經mix了 就會失敗
這是我的心得 給大家參考一下
※ 引述《lunarblue (green52*死智障)》之銘言：
: ※ 引述《kentai (為什麼沒有愛 在我們之間)》之銘言：
: : 我還是沒做出來>< 可恨阿
: : 不論如何都得不到一個點的管><
: : 我把我的步驟寫一下 看大家看一下有什麼錯誤
: 很多的部分前面的版友都講過了..
: 我也是建議你請人帶你做一次吧...
: 看起來閣下應該沒啥流column的經驗
: : 東西有三個點 剪一片約六公分的TLC 用純EA去跑
: 一般少用單一溶劑去流管柱
: : 距離上端0.5cm有一個點 再間隔1cm有第二點(產物) 再間隔1cm有第三點
: : 感覺是分的很開
: Rf值太高了..
: 這樣你EA一灌下去,Rf值0.5跟0.8的點老實說沒啥分離到...
: 請將主要的點調在Rf＝0.3左右,也就是說請換沖提液的極性..
: 用hexane/EA這個系統是比較普遍的選擇..
: : 準備Packing Gel 用的是silica gel 使用的column是250ml 直徑大概5cm吧
: : 用Hexane packing ,Gel大概有20cm高，加壓1次10分鐘 做5次
: 如果你真的覺得那麼難分,可以用濕填的,效果會比較好（不過你的應該不至於難分）
: : load大概有3cm ，等到跑到乳化面的時候，慢慢加入EA 開始跑
: loading太高,一般請在1公分左右..
: 請換大一點的管柱不然就分兩次流吧
: 你極性就已經那麼高了,還loading那麼厚一層,這樣當然很容易mix在一起
: : 用12x75mm的試管去接 20管左右有第1點 23~26有兩點 27~點消失約80管 有三點
: : 所以我大部分的產物都混在三點裡面 好痛苦阿><
: : 另外 Gel常常跑了卻產生龜裂的現象 明明沒乾 不知道為什麼@@
: 因為沖提液極性變太快了
: 基本上你packing時就可以用hexane/EA（Rf＝0.3左右）的系統去packing了
: 然後流的時候就不用換沖提液了,自然也就不會龜裂了
: 如果你真的覺得後面出來的點太慢了,可以慢慢提高沖提液極性將後面的衝出來
: 當然前提是你前面的點已經出來了
: 如果是大量的而且又如你所說點與點之間分隔得很遠的話
: 那其實用一下簡單的flash column也可以快速得到不錯的分離效果
: : 不知道大家有什麼意見>< Thx!
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推
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