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討論串[求救] Baculovirus蛋白表現
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#5
Re: [求救] Baculovirus蛋白表現
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者mysterywind (mysterywind)時間13年前 (2013/03/15 16:41), 編輯資訊
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我生產蛋白是用P2的病毒. SF-9 和 Hi5都做. 使用Bac to Bac的系統. 我有一個疑問 同個系統 有的表現多 有的疑似沒表現. 這跟目標蛋白質的種類有差嗎? 像是 膜蛋白 糖蛋白 封套蛋白...之類. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140.12
#4
Re: [求救] Baculovirus蛋白表現
推噓2(2推 0噓 0→)留言2則，0人參與, 最新作者mysterywind (mysterywind)時間13年前 (2013/03/13 18:05), 編輯資訊
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1. 我有跑過PCR確定基因有進去. 2. 我們沒有測titer 目前是打算先求有表現 再調整. 也怕titer太低 測不到 生長曲線怎麼做?. 我是依照 CPE的情況 來判別是否成功感染. 3. 基本上是3天左右收細胞 跑SDS WB. 因為同樣的方法 其他人的基因有表現出來. 我也有做過別人的基
#3
Re: [求救] Baculovirus蛋白表現
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者vetvet ( )時間13年前 (2013/03/12 22:26), 編輯資訊
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假設clone有作成功....... 讓我想到需要調整的是. 表現條件(病毒感染量，表現時間點......)的優化？. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 122.117.47.247.
#2
Re: [求救] Baculovirus蛋白表現
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者josephkokomo (...)時間13年前 (2013/03/12 13:55), 編輯資訊
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你是指用Baculovirus system表達你要的蛋白嗎. 另外假設是cytosolic protein. 1. Cre那步驟之後 你有確定你的DNA被insert成功嗎. 2. virus 有測過 titer嗎 或是你確定加入virus有成功感染你的cell (可以從生長曲線推測). 3. v
#1
[求救] Baculovirus蛋白表現
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者mysterywind (mysterywind)時間13年前 (2013/03/12 13:29), 編輯資訊
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發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出. 以方便板友幫您追蹤問題. ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----. 請問有人做過Baculovirus的蛋白表現嗎?. 我一直無法表現我的目標蛋白. 確定有轉染成功 也有抽病毒DNA. 但是
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