Re: [求救] Baculovirus蛋白表現
※ 引述《josephkokomo (...)》之銘言：
: ※ 引述《mysterywind (mysterywind)》之銘言：
: : 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
: : 以方便板友幫您追蹤問題
: : ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
: : 請問有人做過Baculovirus的蛋白表現嗎?
: : 我一直無法表現我的目標蛋白
: : 確定有轉染成功 也有抽病毒DNA
: : 但是 跑SDS WB就是沒東西?
: 你是指用Baculovirus system表達你要的蛋白嗎
: 另外假設是cytosolic protein
: 1. Cre那步驟之後 你有確定你的DNA被insert成功嗎
: 2. virus 有測過 titer嗎 或是你確定加入virus有成功感染你的cell (可以從生長曲線推測)
: 3. virus infection 之後 等多久作SDS-PAGE
: Invitrogen(life)的使用手冊有完善的教學
1. 我有跑過PCR確定基因有進去
2. 我們沒有測titer 目前是打算先求有表現 再調整
也怕titer太低 測不到 生長曲線怎麼做?
我是依照 CPE的情況 來判別是否成功感染
3. 基本上是3天左右收細胞 跑SDS WB
因為同樣的方法 其他人的基因有表現出來
我也有做過別人的基因 有表現
就是不知道 為何就是自己的表現不出 ??
想說還有哪些調整比較好!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.19.144
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03/13 20:35, , 1F
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03/13 23:15, , 2F
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