Re: [求救] Baculovirus蛋白表現
※ 引述《mysterywind (mysterywind)》之銘言：
: ※ 引述《josephkokomo (...)》之銘言：
: : 你是指用Baculovirus system表達你要的蛋白嗎
: : 另外假設是cytosolic protein
: : 1. Cre那步驟之後 你有確定你的DNA被insert成功嗎
: : 2. virus 有測過 titer嗎 或是你確定加入virus有成功感染你的cell (可以從生長曲線推測)
: : 3. virus infection 之後 等多久作SDS-PAGE
: : Invitrogen(life)的使用手冊有完善的教學
: 1. 我有跑過PCR確定基因有進去
: 2. 我們沒有測titer 目前是打算先求有表現 再調整
: 也怕titer太低 測不到 生長曲線怎麼做?
: 我是依照 CPE的情況 來判別是否成功感染
: 3. 基本上是3天左右收細胞 跑SDS WB
: 因為同樣的方法 其他人的基因有表現出來
: 我也有做過別人的基因 有表現
: 就是不知道 為何就是自己的表現不出 ??
: 想說還有哪些調整比較好!!
我生產蛋白是用P2的病毒
SF-9 和 Hi5都做
使用Bac to Bac的系統
我有一個疑問 同個系統 有的表現多 有的疑似沒表現
這跟目標蛋白質的種類有差嗎? 像是 膜蛋白 糖蛋白 封套蛋白...之類
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