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討論串[求救] 蛋白質誘導不出來!!!
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#5
Re: [求救] 蛋白質誘導不出來!!!
推噓2(2推 0噓 6→)留言8則，0人參與, 最新作者dodomilk (豆漿)時間15年前 (2010/05/20 00:45), 編輯資訊
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不好意思 想借這個標題問個問題. 之前biingru網友有提到使用pET system時. 在養許多代之後promotor的sequence會被重組. 請問只要是使用T7 promotor, lac operator的表現方式. promotor gene都會被重組嗎？. 或者說, 只要是使用T7
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#4
Re: [求救] 蛋白質誘導不出來!!!
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者biingru (Worker)時間15年前 (2010/05/19 22:55), 編輯資訊
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不好意思，我說得有點不清不楚. PET system 是一個很棒的蛋白表達系統，只是 BL21(DE3) 讓我不爽而已。. 若是可能的話，換個 Host 看看，不過前題是可以讓 PET 可以相容. 可以跟廠商要 PET 的 Full Catalog (不是 plasmid only). 後面附錄的地
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#3
Re: [求救] 蛋白質誘導不出來!!!
推噓2(2推 0噓 0→)留言2則，0人參與, 最新作者hellheavn (蒼天落日)時間15年前 (2010/05/19 12:13), 編輯資訊
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根據最後的敘述 我也要提出附議. 我曾經養過兩三代 養個兩三代以後就突變了 怎樣都養不出我該會出來的蛋白. 經過老闆求證也是會有這個狀況,老闆是說"大概百萬分之一的機率"這麼小. 另外. 我有一陣子用IPTG誘導失敗率也很高(前一天配的也掛給你看). 後來我就索性全部改用乳糖了. 每次都有表達呢~(
#2
Re: [求救] 蛋白質誘導不出來!!!
推噓2(2推 0噓 2→)留言4則，0人參與, 最新作者biingru (Worker)時間15年前 (2010/05/19 02:28), 編輯資訊
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我直接回好了，. 這種蛋白表達本來就沒有一定的對或錯的方法. 我看你的步驟也沒問題. 我把我的經驗告訴你.... 你接上 plasmid 之後不知到有沒有先定序，檢查看看有沒有 in frame. 若是有 in frame. 另外你是用 pet system，這裡面有隱藏版暗黑. 那就是經過 tra
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#1
[求救] 蛋白質誘導不出來!!!
推噓3(3推 0噓 7→)留言10則，0人參與, 最新作者CCDMer (Best)時間15年前 (2010/05/19 00:39), 編輯資訊
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各位板大好:. 最近遇到了一個很頭痛的問題~又急著又無奈所以只能來這求救. 我使用pET101接上的我的目標基因~用BL21(DE3)進行誘導. 我的方式是pET101/BL21隔夜培養後, 隔天再取1CC加入到新的LB medium. 誘導到OD=0.5~0.6 ,加入IPTG(1mM)後, 37
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