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討論串[求救] transposon要做plasmid rescue
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#5
Re: [求救] transposon要做plasmid rescue
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者pocheng0227時間17年前 (2008/08/12 11:59), 編輯資訊
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請問要怎麼check啊?. Tn5 transposon含有kanamycin resistant gene,. 如果能在kanamycin的盤上長的話, 是不是代表E.coli體內含有Tn5的plasmid啊?. 有pellet, 是抽出來之後跑膠沒東西. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(pt
#4
Re: [求救] transposon要做plasmid rescue
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者vn506100 (vn506100)時間17年前 (2008/08/12 09:07), 編輯資訊
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應該是長雜菌。你做的這個方法本來成功機率就不高吧?!. genome那麼大，而transposon只跳到一個位置，要用用酵素切又要sel-ligation. 本來機率就很低，就算成功應該也只會1,2顆而已吧!. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 61.217.63
#3
Re: [求救] transposon要做plasmid rescue
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者davideason (Davideason)時間17年前 (2008/08/11 23:55), 編輯資訊
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問題極可能出在步驟一. 使用多一點DNA下去切. 然後過PCI+酒精沉澱 或是 gel extraction. 高溫失活有時候容易放槍. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 118.171.12.137.
#2
Re: [求救] transposon要做plasmid rescue
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者A65 (對!我是零食控!)時間17年前 (2008/08/11 19:33), 編輯資訊
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長出來的菌沒先check過嗎?. plasmid抽不出來是怎樣的抽不出來?. 是沒有pellet還是跑不出東西?. ^^^^^^^ 印象中這隻長出來的很像都不大~ ^^". 其實這樣描述還是很難講問題出在哪~. 感覺很像中間略過很多步驟. 不知道你們是怎麼確定colony的?. --. ※ 發信站:
#1
[求救] transposon要做plasmid rescue
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者pocheng0227時間17年前 (2008/08/11 11:11), 編輯資訊
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大家好^^. 我最近在做tansposon的實驗 用的是Tn5的transposon 對象是細菌. 目前已經進行到plasmid rescue的階段 但是遇到瓶頸 想請教有經驗的高手. 流程大致如下:. 1.把細菌的genomic DNA用酵素digestion, 3hr. Heat inactiv
(還有155個字)
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