[求救] transposon要做plasmid rescue
大家好^^
我最近在做tansposon的實驗 用的是Tn5的transposon 對象是細菌
目前已經進行到plasmid rescue的階段 但是遇到瓶頸 想請教有經驗的高手
流程大致如下:
1.把細菌的genomic DNA用酵素digestion, 3hr. Heat inactivate
2.ligation, O/N
3.transform到DH5a (heat shock的方式)
4.鋪盤(含有抗生素kanamycin)
接著將盤上長出來的colony養菌, 然後抽plasmid, 可是都抽不出東西
(這個部分這樣做對嗎?)
我發現transform, 鋪盤之後長出來的DH5a, 生長速度很慢
37度C, O/N長出來的colony很小顆, 我還多放了一天
會不會有可能是污染呢?
還是說digestion ligation的過程有可能出問題?
感謝回答^^
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08/11 18:45, , 1F
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