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討論串[求救] 請問有關PCR的問題
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#5
Re: [求救] 請問有關PCR的問題
推噓2(2推 0噓 6→)留言8則，0人參與, 最新作者sGoat (無三小羚羊)時間18年前 (2008/01/17 19:29), 編輯資訊
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你的forward會形成幾個不容易解開的hairpin.... reverse倒是不錯.... 對於你0.5k的band我想可能是你forward的hairpin造成的.... 自己黏自己就形成template跟primer了(爆). 因為你在文中有提到將溫度提高就不會出現.... 但是因為你提高的
(還有440個字)
#4
Re: [求救] 請問有關PCR的問題
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者annesamuel (as)時間18年前 (2008/01/17 12:07), 編輯資訊
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Negative control 的水是用0.2micrometer濾紙過濾再滅菌的二次水. 引子 (primer). Forward --- 968fgc序列 ： 5’-CGC CCG GGG CGC GCC CCG GGC GGG. GCG GGG GCA CGG GGG G. AACGCGAA
(還有6個字)
#3
Re: [求救] 請問有關PCR的問題
推噓2(2推 0噓 1→)留言3則，0人參與, 最新作者annesamuel (as)時間18年前 (2008/01/16 16:29), 編輯資訊
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我的sample跑出還的長度大約 0.5Kb. 如果annealing temp 提高 negative control 的band就不見了. 但我的sample跑出來的量就非常少非常少. 有的sample甚至跑不出來. primer dimer的可能性也有考慮過. 也有請我學妹做 結果也是一樣.
#2
Re: [求救] 請問有關PCR的問題
推噓4(4推 0噓 3→)留言7則，0人參與, 最新作者annesamuel (as)時間18年前 (2008/01/15 19:01), 編輯資訊
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已重新做過很多次. 所有的東西都換新的. dNTP是附加在 Taq Mix裡. Taq Mix 也是拿全新的. 跑電泳的膠也check過. 沒loading sample時 是沒有 band的. sorry, 我不知道如何把電泳的圖檔Po 上去. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc).
#1
[求救] 請問有關PCR的問題
推噓5(5推 0噓 2→)留言7則，0人參與, 最新作者annesamuel (as)時間18年前 (2008/01/15 17:06), 編輯資訊
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我的sample是細菌的DNA. Negative control 一直有band. 各種污染情況都有考慮過了. 包括水, primer, Taq.Tip, eppendof.. 等等. 不知道是那裡出了問題. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140.117.9
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