[求救] PCR P不出來
各位大大好
事情是這樣的
我從FFPE的sample中抽取出了gDNA
要從裡面去P某段可能有mutation的地方
位子是在某個基因的Promoter靠近ATG的地方約100多bp
但是陸陸續續P了一個多月 始終都是P不出來
試過以下方法
增加DNA的量、Dilute DNA、通PCR inhibitor colume、增加primer量、增加cycle數、降
低annealing temperature、加DMSO、換Hot start的Taq、換過五組primer、做nested
PCR
通通沒用
DNA有跑過電泳 亮帶大約是在400左右
也有P過其他基因 是可以P出來的
唯獨我要P的這個地方怎麼P都P不出來
請問各位前輩 還有什麼方法可以調整的嗎??
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.33
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阿 造成誤解真抱歉~ ~ 其實應該是某種cancer的部分case P我要的東西P不出來
但是其他cancer的case或normal tissue是可以P出來的 另外我也有跟老闆討論過deletion
的問題 但是他覺得block裡面其實還是有一些normal tissue 應該不會全部都deletion
再加上文獻都只有提到point mutation的部分 在我的目標序列裡面還沒有看到deletion的
案例 當然也是不能完全排除deletion的可能 所以我其實只是想問問看 還有哪些地方
是可以調整 感謝各位大大
※ 編輯: ai760721 來自: 140.112.125.33 (11/29 09:09)
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