Re: [求救] His-tag protein 純化 無法binding

看板Biotech作者 (六百)時間12年前 (2011/10/07 20:41), 編輯推噓1(1推 0噓 4→)
留言5則, 3人參與, 最新討論串2/3 (看更多)
不用 urea 的理由其實有點奇怪 你確定你不 denature, 這蛋白質就是有效的嗎？ --- 真的死也不想 denature 的話, 那把 his-tag 換個位置看看吧 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 97.92.0.104
推
10/07 21:10, , 1F
他用native的理由很合理啊，你不知道refolding後的結構仍一樣
10/07 21:10, 1F
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10/07 22:57, , 2F
我的意思是 E.coli 表現出來的你本來就不知道是不是native
10/07 22:57, 2F
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10/08 02:26, , 3F
雖然用E.coli表現出來的protein不確定是native，但在經過
10/08 02:26, 3F
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10/08 02:31, , 4F
denature後renature程序是否會增加protein folding的不正確
10/08 02:31, 4F
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10/08 02:32, , 5F
性?才想避免這個過程
10/08 02:32, 5F
我的意思是 現在反正也不知道你生產出來的東西 folding 到底對不對 然後又純化不出來 那何不試試看 denature 即便之後 refolding 不成功 嘗試純化 denatured protein 的過程也會得到很多有助於 troubleshooting 的資訊 成本又多不了多少 就多養一批菌 多用一個透析袋而已 而且又不是同時只能做一個實驗 試著純化 denatured protein 的同時 還可以 1. 調整養菌的條件 2. （評估是否需要）重做 construct, 把 his tag 接到另一頭 ※ 編輯: boblu 來自: 97.92.0.104 (10/08 22:03)
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