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討論串[求救] His-tag protein 純化 無法binding
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#3
Re: [求救] His-tag protein 純化 無法binding
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者wahl (選擇)時間14年前 (2011/10/08 23:52), 編輯資訊
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有幾種建議：. 1) 增加6xHis為10xHis 這個方法在一些paper上有討論過. 2) 提高binding buffer的鹽濃度（如 加1~1.5M NaCl）。這個方法對DNA或RNA. binding protein特別有效。. 3) 先用Ammonium sulfate梯度 找到沈澱目
#2
Re: [求救] His-tag protein 純化 無法binding
推噓1(1推 0噓 4→)留言5則，0人參與, 最新作者boblu (六百)時間14年前 (2011/10/07 20:41), 編輯資訊
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不用 urea 的理由其實有點奇怪. 你確定你不 denature, 這蛋白質就是有效的嗎？. ---. 真的死也不想 denature 的話, 那把 his-tag 換個位置看看吧. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 97.92.0.104. 我的意思是 現在反
(還有171個字)
#1
[求救] His-tag protein 純化 無法binding
推噓2(2推 0噓 9→)留言11則，0人參與, 最新作者diffa2 (Zero)時間14年前 (2011/10/07 20:34), 編輯資訊
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目前遇到與protein 純化的問題，我使用His-tag / Ni-NTA來純化，在induction. 後protein有明顯的表現量，經破菌後也在supernatant中，但在之後的binding上，. protein卻無法binding，大部分都在flow through中，之後的bindi
(還有533個字)
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