[求救] 請問RNA去除genomic DNA的方法

看板Biotech作者 (草履蟲)時間14年前 (2011/09/27 22:17), 編輯推噓7(7推 0噓 9→)
留言16則, 8人參與, 最新討論串1/6 (看更多)
目前的狀況是這樣的,我們實驗室是用TRIzol抽取RNA. 抽取的過程中也很順利,RNA跑完電泳後發現有genomic DNA殘留. 但是因為要把RNA反轉錄成cDNA,所以目前是先取出要反轉錄的RNA的量出來. 取出來後打算加入DNase I於37度C作用30分鐘後,再於65度C作用5分鐘使DNase I失活. 我的問題就是在去除genomic DNA的過程中,不知道會不會使RNA降解? 假如RNA會降解的話,請問前輩還有什麼方式可以去除已經萃取好的RNA中的genomic DNA. 感謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.165.57.164
推
09/27 23:02, , 1F
1.會 2.沒太大影響吧 有點忘了XD
09/27 23:02, 1F
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09/27 23:06, , 2F
我這樣做也可以維持1.8~1.9 band也很明顯 所以我想沒差吧
09/27 23:06, 2F
推
09/27 23:13, , 3F
看你操作夠不夠乾淨阿 不小心有RNAse掉進去就毀啦XD
09/27 23:13, 3F
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09/27 23:13, , 4F
請問前輩反轉錄好的cDNA跑電泳的圖大約會是怎樣子?
09/27 23:13, 4F
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09/27 23:34, , 5F
多少都會漏失一些RNA，應該是沒有降解這個問題吧..
09/27 23:34, 5F
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09/27 23:35, , 6F
印象中做雙股跑出來是smear，單股我不知道
09/27 23:35, 6F
推
09/28 00:23, , 7F
應該說 目的是要啥? PCR的話 primer 設計跨EXON就好
09/28 00:23, 7F
推
09/28 02:20, , 8F
RT沒有specific primer就拿去跑應該一片亮晶晶吧
09/28 02:20, 8F
推
09/28 10:51, , 9F
1 會 2.可以外加如ribolock等RNase inhibitor
09/28 10:51, 9F
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09/28 17:31, , 10F
datro大,我是要往下進行Q-PCR,所以primer設計跨exon就好
09/28 17:31, 10F
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09/28 17:31, , 11F
嗎?,那是不是就可以跳過用Dnase I treat的步驟?
09/28 17:31, 11F
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09/28 17:34, , 12F
另外,感覺各位前輩都會加RNase inhibitor,但是假如不考慮
09/28 17:34, 12F
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09/28 17:35, , 13F
RNase的汙染,純粹的37度C和65度C會不會直接使RNA降解?
09/28 17:35, 13F
推
09/30 00:21, , 14F
用amplification grade DNase I 效果很好
09/30 00:21, 14F
推
10/01 22:54, , 15F
37度30分鐘和65度10分鐘是不會使RNA降解的
10/01 22:54, 15F
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10/01 22:55, , 16F
另外，室溫24小時也不會有問題..至少band都看得到
10/01 22:55, 16F
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