Re: [求救] 磷酸化蛋白
※ 引述《Rarelay ()》之銘言：
: 我不知道這個磷酸化位點是已知還是未知。
: 假設他是已知的，
: 你可以考慮將之突變成 A or D (E)
: 若你推測他是處理藥物會磷酸化，那就突變成 A，
: 處理藥物應該會不受藥物影響，同 negative control 表型。
: 你就可以確定磷酸化的確在藥物處理後細胞產生反應中扮演重要角色。
: 若是處理藥物會去磷酸化，則用 phospho-mimic 胺基酸 D or E。
: 如果是未知的，那你可以考慮純化蛋白後，
: 用 TiO2 enrich phosphopeptide 進 LC-MS-MS 分析。
: 如果不知道蛋白質或是不知道藥物處理後的 phenotype，
: 那我就沒辦法了（我想可能性很小）。
假如這個(去)磷酸化的位置對於蛋白功能扮演相當重要的角色
把這個位置做point mutation 就算藥物不是控制這個磷酸化的調節
一樣會看到negative control 表型
例如說把IkB的磷酸化位點的點突變 進而造成IkB不會被ubiquitination
而一個未知的藥物A是調控IkB ubiquitination的部分
IkB的磷酸化位點的點突變沒辦法看出這個藥物到底是調節哪個部分
這是敝人愚昧的見解 請多多指點 謝謝
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◆ From: 124.11.212.24
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