※ 引述《lookfor0326 (find)》之銘言：
: 不好意思...
: 想請教一個小小的問題
: 由於目前的實驗是以藥物測試蛋白質的改變
: 但WB結果顯示target蛋白質並無減少或增多的情況，
: 於是想要去探討有沒有可能會是影響到target protein磷酸化，
: 但因為手邊沒有target protein 磷酸化抗體可以用來測試這個問題，
: 因此想要請教大家:
: 檢測這類的問題(磷酸化蛋白)是不是只能靠抗體才能解決了。
: 謝謝~
我不知道這個磷酸化位點是已知還是未知。
假設他是已知的，
你可以考慮將之突變成 A or D (E)
若你推測他是處理藥物會磷酸化，那就突變成 A，
處理藥物應該會不受藥物影響，同 negative control 表型。
你就可以確定磷酸化的確在藥物處理後細胞產生反應中扮演重要角色。
若是處理藥物會去磷酸化，則用 phospho-mimic 胺基酸 D or E。
如果是未知的，那你可以考慮純化蛋白後，
用 TiO2 enrich phosphopeptide 進 LC-MS-MS 分析。
如果不知道蛋白質或是不知道藥物處理後的 phenotype，
那我就沒辦法了（我想可能性很小）。
喔對了，
如果是常用的 anti-phospho peptide 的抗體，
買來應該是最省事的。
如果是新的機制，而且必須要處理少人研究的蛋白質，
那謹慎點先確認再打抗體會比較理想。
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※ 編輯: Rarelay 來自: 140.112.79.42 (09/11 16:25)
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