Re: [求救] 有沒有人用過gel filtration???

看板Biotech作者premire (熱騰騰的泡麵)時間14年前 (2011/05/02 18:02)推噓4(4推 0噓 19→)

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原文恕刪參考了sephadex產品說明書其中一段如下： Use 0.15 M NaCl or a buffer with equivalent ionic strength to avoid pH dependent nonionic interactions with the matrix. At very low ionic strength, the presence of a small number of negatively charged groups may cause retardation of basic proteins and exclusion of acidic proteins. 根據以上我的解讀是column的metrix是dextran, 帶有負電荷OH group,在極低的離子強度假如sample帶有正負電荷都會和metrix產生吸附或是排斥現象.因此必須要使用0.15M鹽類增加buffer的離子強度,減少sample與metrix的交互作用. 另外有提到 When working with a new sample, try these conditions first: 0.05 M sodium phosphate, 0.15 M NaCl, pH 7.0 or select the buffer into which the product should be eluted for the next step (e.g., further purification, analysis, or storage.) 意即使用時建議先試試看0.05M sodium phosphate + 0.15 M NaCl 問題來了！之前使用的buffer組成為D-PBS,本身緩衝濃度Sodium Phosphate Dibasic 8.10 mM, Potassium Phosphate Monobasic 1.47 mM, Sodium Chloride 138 mM 分離結果是看不到後面的小分子elute out 問題1:若改為說明書建議的配方, NaCl濃度沒差多少,而是差在緩衝溶液的濃度(50 mM)會不會對於我的分離結果會有改善呢問題2:我的大分子是SOD,在pH 7.4環境下應該不會帶特定電荷, 還需要這麼高（0.15M）鹽類嗎？由於sample快沒了每一次的使用都盡量力求效率請有經驗的大大指教！！！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.10

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