Re: [求救] 有關transformation問題
除了以上大大補充的
我覺得以PCR產物純化來說
若只是 "酒精沉澱"
的確是單純用來去除 PCR buffer 等鹽類環境
但以上有偷懶的成分在 XD
通常還是會跑個膠...切膠來做純化
好處有兩個 1.去除雜 band 2.去除template
第二點我個人認為是滿重要的
只要一點點量的 intact plasmid
就很大機會被直接 transform
也就容易挑到自接
至於為什麼 ligation 產物不純化
通常 final 接的環境會控制在 10~15 ul 左右
(聽說體積越高碰撞機率越低這樣)
這種體積做純化技術不好東西很容易就被純丟了
沒有必要冒這個風險...
而且做得好的話不用取太多去 transform 也 ok
如果是用電的方法送入
取太多去送的話
嗯...會電爆
基本上鹽濃度真正有影響是在這個地方
結論是
反正還有 heat shock ...XDDD
※ 引述《smilegirl24 (susu)》之銘言：
: 最近在上生物技術的實驗課
: 從PCR→DNA purification→enzyme cutting→DNA ligation→transformation
: 目前學到這裡
: 覺得很好奇 從PCR到限制酵素切割 需要經過DNA純化
: 原因是因為要讓從PCR的環境
: 轉變成適合限制酵素切割的環境
: 故要經過DNA純化
: (這樣說有錯嗎?)
: 那為什麼在做transformation之前沒有做純化的步驟呢?
: 利用ligation後未純化的mixed DNA不會影響後面要計算的轉殖效率嗎?
: 若將plate放太久，是什麼原因造成衛星現象?
: 我是初學者 很多都不懂 請大家幫我解答一下!!
: 感激不盡 > <
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