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討論串[求救] 有關transformation問題
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#4
Re: [求救] 有關transformation問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者ganbaol (ganbaol)時間15年前 (2011/04/04 14:28), 編輯資訊
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除了以上大大補充的. 我覺得以PCR產物純化來說. 若只是 "酒精沉澱". 的確是單純用來去除 PCR buffer 等鹽類環境. 但以上有偷懶的成分在 XD. 通常還是會跑個膠...切膠來做純化. 好處有兩個 1.去除雜 band 2.去除template. 第二點我個人認為是滿重要的. 只要一點
(還有210個字)
#3
Re: [求救] 有關transformation問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Ianthegood (雜碎。)時間15年前 (2011/04/03 09:33), 編輯資訊
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pcr可能有multiple band. 一般都是要跑膠再切出來. 個人倒覺得restriction buffer的鹽濃度很高 pcr產物如果乾淨夠濃. 直接切也無妨吧. --. 人好 欠表. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 110.174.79.41.
#2
Re: [求救] 有關transformation問題
推噓2(2推 0噓 1→)留言3則，0人參與, 最新作者boblu (六百)時間15年前 (2011/04/03 00:12), 編輯資訊
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基本正確. 就單純取用的 plasmid 溶液體積 和菌液相比甚小 所以就不管了. 且ligation 一次用的 DNA 量也很低 再重新純化又有損失. 有吃到抗藥性 plasmid 的那隻菌長出的菌落會慢慢把周圍的抗生素都分解掉. 然後沒有吃到抗藥基因的菌就也可以快快樂樂的生長了 所謂狐假虎威就是
#1
[求救] 有關transformation問題
推噓2(2推 0噓 2→)留言4則，0人參與, 最新作者smilegirl24 (susu)時間15年前 (2011/04/02 17:27), 編輯資訊
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最近在上生物技術的實驗課. 從PCR→DNA purification→enzyme cutting→DNA ligation→transformation. 目前學到這裡. 覺得很好奇 從PCR到限制酵素切割 需要經過DNA純化. 原因是因為要讓從PCR的環境. 轉變成適合限制酵素切割的環境. 故
(還有53個字)
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