Re: [求救] 有關transformation問題
※ 引述《boblu (六百)》之銘言：
: ※ 引述《smilegirl24 (susu)》之銘言：
: : 最近在上生物技術的實驗課
: : 從PCR→DNA purification→enzyme cutting→DNA ligation→transformation
: : 目前學到這裡
: : 覺得很好奇 從PCR到限制酵素切割 需要經過DNA純化
: : 原因是因為要讓從PCR的環境
: : 轉變成適合限制酵素切割的環境
: : 故要經過DNA純化
: : (這樣說有錯嗎?)
: 基本正確
pcr可能有multiple band
一般都是要跑膠再切出來
個人倒覺得restriction buffer的鹽濃度很高 pcr產物如果乾淨夠濃
直接切也無妨吧
: : 那為什麼在做transformation之前沒有做純化的步驟呢?
: : 利用ligation後未純化的mixed DNA不會影響後面要計算的轉殖效率嗎?
: 就單純取用的 plasmid 溶液體積 和菌液相比甚小 所以就不管了
: 且ligation 一次用的 DNA 量也很低 再重新純化又有損失
: : 若將plate放太久，是什麼原因造成衛星現象?
: 有吃到抗藥性 plasmid 的那隻菌長出的菌落會慢慢把周圍的抗生素都分解掉
: 然後沒有吃到抗藥基因的菌就也可以快快樂樂的生長了 所謂狐假虎威就是這個意思
--
人好 欠表
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 110.174.79.41
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 3 之 4 篇)：