Re: [求救] 有關transformation問題
※ 引述《smilegirl24 (susu)》之銘言：
: 最近在上生物技術的實驗課
: 從PCR→DNA purification→enzyme cutting→DNA ligation→transformation
: 目前學到這裡
: 覺得很好奇 從PCR到限制酵素切割 需要經過DNA純化
: 原因是因為要讓從PCR的環境
: 轉變成適合限制酵素切割的環境
: 故要經過DNA純化
: (這樣說有錯嗎?)
基本正確
: 那為什麼在做transformation之前沒有做純化的步驟呢?
: 利用ligation後未純化的mixed DNA不會影響後面要計算的轉殖效率嗎?
就單純取用的 plasmid 溶液體積 和菌液相比甚小 所以就不管了
且ligation 一次用的 DNA 量也很低 再重新純化又有損失
: 若將plate放太久，是什麼原因造成衛星現象?
有吃到抗藥性 plasmid 的那隻菌長出的菌落會慢慢把周圍的抗生素都分解掉
然後沒有吃到抗藥基因的菌就也可以快快樂樂的生長了 所謂狐假虎威就是這個意思
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