[求救] western

看板Biotech作者 (o_o)時間16年前 (2009/10/15 13:24), 編輯推噓1(105)
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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 最近我取魚的組織作western,一開始電泳跑得很順利沒有問題。 但是transfer完以後把SDS-PAGE染色後發現gel的蛋白質都糊糊的一大片,但是用其他人 養細胞的樣品是沒有問題,不知道原因出在哪裡? 另外我發現加完ECL反應完後PVDF膜上面會出現棕黃色的band,也不知道是哪個關係造成的?以前做的時候PVDF膜都沒有band 產生? 作到快瘋掉了。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.121.200.169

10/15 14:56, , 1F
protein過量?
10/15 14:56, 1F

10/15 16:12, , 2F
PVDF membrane出現褐黃色是抗體太強或者protein load太多
10/15 16:12, 2F

10/15 16:13, , 3F
gel上蛋白質糊一大片,那PVDF membrane上band都正常?
10/15 16:13, 3F

10/15 16:15, , 4F
是不是魚組織沒有均質完全?蛋白萃取都正常?
10/15 16:15, 4F

10/15 16:16, , 5F
sample有煮過嗎? 有煮過頭嗎?
10/15 16:16, 5F

10/15 16:25, , 6F
除去以上因素還是如此的話...就可能電泳跑太快了0.0a
10/15 16:25, 6F
文章代碼(AID): #1Arh7mNR (Biotech)
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