Re: [求救] IHC 不太順利
※ 引述《YuDavid (討厭失眠)》之銘言：
: autoclave的時候 泡著真的會脫落 昨天我就沒有泡著
: 只是放在潮濕的buffer的鐵盒子裡拿去autoclave
: 當然 都沒有做出來 哀
: 後來我用微波爐加熱到沸 再把slide泡進去 過一分鐘後拿出
: 再把buffer微波到沸 循環了七八分鐘左右
: 也是沒有很成功ˊˋ
脫落的問題, 我們曾經有試過不同廠牌的玻片,
DAKO Silanized Slides (Silane Coating) Code No. S3003
的玻片是耐得起煮沸而不容易脫落的, 如果可以就從切吧.(可以跟永吉訂)
另外, 還有其他的 Antigen retrival 的方法可用.
你可試試其他類的buffer, 因為sodium citrate雖然常用, 但很多時候signal會太弱.
1.For Citrate: Bring slides to a boil in 10 mM sodium citrate buffer pH 6.0
then maintain at a sub-boiling temperature for 10 minutes. Cool slides on
bench top for 30 minutes.
2.For EDTA: Bring slides to a boil in 1 mM EDTA pH 8.0 followed by 15
minutes at a sub-boiling temperature. No cooling is necessary.
3.For TE: Bring slides to a boil in 10 mM TE/1 mM EDTA/0.05% Tween-20, pH
9.0 then maintain at a sub-boiling temperature for 18 minutes. Cool on the
bench for 30 minutes.
4.For Pepsin: Digest for 10 minutes at 37°C.
: :
: 抗體是學姊給的 好像是他自己純化出來以前拿去做western用的
: 我在跟他討論看看
: 我們都沒做過IHC@@
: 但是我想 抗體應該不會有問題吧@@
能做WB的抗體, 不見得能做IHC,所以一定要有Positive control.
說不定跟本就是抗體的問題.
啊, 你學姐是怎樣, 沒手沒腳哦, 要data是不會自己做哦~, 只會壓榨學弟妹嗎？嗟~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
推
04/02 03:02, , 1F
04/02 03:02, 1F
→
04/02 03:03, , 2F
04/02 03:03, 2F
討論串 (同標題文章)