Re: [問題]DAPI染色

看板Biotech作者 (MISA)時間17年前 (2009/02/23 06:31), 編輯推噓5(5推 0噓 10→)
留言15則, 5人參與, 7年前最新討論串2/3 (看更多)
不好意思 我想問的第個問題是 貼壁細胞 通常 直接在dich或well中 wash 固定 染色 拍照 那麼懸浮細胞 是離心後 wash pellet 在tube裡 固定和染色嗎? 那樣該怎麼拍照及定量??(貼壁細胞是直接在dich或well內 記數固定視野的細胞螢光) ※ 引述《mito0222 (MISA)》之銘言： : 貼壁細胞 通常是WASH 固定後 在染DAPI 之後再用螢光顯微鏡拍照 : 請問懸浮細胞 要怎麼做凋亡現象的染色呢 : 另外再請問DAPI 可用PI取代嗎? 這兩者有何不同 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.175.51.13
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02/23 09:18, , 1F
沒作過所以不敢大放噘詞~但要"定量"是否就要到flow才準?!
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我說定量的意思是指 每多少顆細胞內有多少顆有DAPI的螢光 ※ 編輯: mito0222 來自: 218.175.51.13 (02/23 20:00)
推
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我之前做的時候,是用拍照軟體各取三個視野
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然後算平均值
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可是這樣會有很嚴重的主觀誤差...
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因為自己想選多就照多的地方= =a
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所以這種實驗只能算是半定量.要真的準確定量要用flow
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拍照真的很麻煩...一個well拍三次,一個濃度有三重複
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而且染也不可以染太久..背景會太亮
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推
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你可以找找看paper 我有看過有些會改變培養環境
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使細胞有更大機會附著 然後觀察的相關方法 冏>
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推
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gelatin-coated glass-bottom dish to immobilize
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推
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可以用cytospin機器把懸浮細胞打上slide再fix
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之後染色等等就跟貼壁細胞的作法差不多
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然後算平均值 https://muxiv.com
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01/03 16:51, 7年前 , 15F
所以這種實驗只能算是半 http://yofuk.com
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17年前, 02/22
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