Re: [求救] cloning的問題
※ 引述《nidus (咕嘰)》之銘言：
: 實驗流程大略如下：
: ligation以及圖菌後
: 隔天長出colony
: 挑單一colony做cloning PCR
: 檢測是否目標基因有接進vector中
: 而我遇到的情況是cloning PCR檢測有看到目標基因被放大
: 而我將該菌珠培養O/N後 隔天抽plasmid
: 再做enzyme digestion 結果卻切不出那段基因出來
: 而且plasmid的位子好像在空的vector位子
: 送定序出來的結果也很詭異
: ps我利用vector上的CMV30為primer 定序結果不到沒有我塞進去的gene
: 序列也跟vector不同
: 請問有人遇到跟我類似的狀況嗎？？
plasmid用RE切完
跑膠的時候如果看起來只有切出linear form的plasmid
1. 挑出來是偽陽性的colony (這樣就沒救了 重挑吧)
2. RE可能切不動相同切點 (可以往外再找切點切切看)
我自己做的習慣是一盤會挑5~10個colonies
一起切這樣比較快!!
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