[求救] cloning的問題

看板Biotech作者 (owl628)時間16年前 (2008/07/03 11:55), 編輯推噓7(7推 0噓 8→)
留言15則, 6人參與, 最新討論串1/6 (看更多)
小弟我在做pET-32a及pGEX的clone 分別接上1.5kb及2.0kb的片段 希望讓蛋白接上不同的tag 但是挑了好多都挑不到想要的colony amp plate沒有問題 因為有做過negative control 一顆都沒有長 而有transformation的菌長的滿多也滿漂亮的 但是就是怎麼都挑不到 想請問一下 是這兩個vector本來就不好挑嗎??? 還是我自己的問題 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.139.218
推
07/03 13:49, , 1F
這兩種vector很常用很好挑阿 實驗細節PO一下吧
07/03 13:49, 1F
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07/03 14:02, , 2F
不好意思~可以請問一下樓上PO哪些細節比較有幫助呢?感謝^^
07/03 14:02, 2F
推
07/03 14:52, , 3F
vecter only長幾顆呢?
07/03 14:52, 3F
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07/03 14:57, , 4F
我把原本的vector做transform,長的滿多的,密密麻麻的,謝謝~
07/03 14:57, 4F
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07/03 15:41, , 5F
Negative Control長很多的話 Vector沒處理好嗎???
07/03 15:41, 5F
推
07/03 15:42, , 6F
vector only是只把已經切開過的vector再拿去ligate喔
07/03 15:42, 6F
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07/03 16:54, , 7F
sorry因為我是用兩個不同的切點去接,所以沒有做vector only
07/03 16:54, 7F
推
07/03 20:19, , 8F
vector切完有純化嗎還是直接加片段ligation?有算接合比率嗎?
07/03 20:19, 8F
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07/03 21:55, , 9F
有做膠回收,比率1比3到1比8左右都試過了,謝謝大家^^
07/03 21:55, 9F
推
07/04 01:02, , 10F
因為怕enzyme digest不完全 所以vector only作一下比較好喔
07/04 01:02, 10F
推
07/04 01:07, , 11F
同意jjogp,double digestion完作個vector only吧...確定有切
07/04 01:07, 11F
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07/04 01:10, , 12F
另外要ligation之前將vector 75度heat一下再加進去會比較好.
07/04 01:10, 12F
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07/04 13:09, , 13F
樓上是說將處理好的vector heat一下嗎???請問大概多久呢??
07/04 13:09, 13F
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07/04 13:10, , 14F
還有可以請問這樣的目的為何嗎???謝謝大家的意見喔^^
07/04 13:10, 14F
推
07/04 16:21, , 15F
大概五分鐘,避免黏回去或是二級結構...
07/04 16:21, 15F
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文章代碼(AID): #18R4t110 (Biotech)
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