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討論串[求救] cloning的問題
共 6 篇文章
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#6
Re: [求救] cloning的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者arzakiii (Duke. Bio)時間17年前 (2008/12/12 13:28), 編輯資訊
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plasmid用RE切完. 跑膠的時候如果看起來只有切出linear form的plasmid. 1. 挑出來是偽陽性的colony (這樣就沒救了 重挑吧). 2. RE可能切不動相同切點 (可以往外再找切點切切看). 我自己做的習慣是一盤會挑5~10個colonies. 一起切這樣比較快!!.
#5
Re: [求救] cloning的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者satantaco (笨蛋TACO)時間17年前 (2008/12/08 19:55), 編輯資訊
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我自己之前的實驗遇過相類似的問題. colony PCR有目標產物 大小也接近. 不過作enzyme digestion卻沒做出來. 再回頭抽plasmid 及再作PCR 確定目標產物有量化後. 因為enzyme digestion沒結果 所以我是利用目標序列內部的primer. 作了好幾組的PCR
(還有311個字)
#4
Re: [求救] cloning的問題
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者damyr (趴趴熊)時間17年前 (2008/12/08 13:52), 編輯資訊
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長出幾顆? 有沒有可能是Self-ligation?. Competent cells的Copy number跟plasmid的大小可以推算出預期colony數negative control有沒有做? 水汙染了?這不詭異啊，就是沒成功嘛，重做吧. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
#3
Re: [求救] cloning的問題
推噓1(1推 0噓 1→)留言2則，0人參與, 最新作者ribose (保濟丸)時間17年前 (2008/12/08 13:14), 編輯資訊
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這句的意思是... 看不太懂.... 1. 抽 plasmid 的 colony 是和 coloning PCR 同一顆嗎. 2. PCR 的產物一定是你預期的目標基因嗎？會不會是 vector 上的序列. 3. enzyme digestion 結果切不出那段基因出來，請問切出來的結果是....
#2
[求救] cloning的問題
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者nidus (咕嘰)時間17年前 (2008/12/08 00:22), 編輯資訊
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實驗流程大略如下：. ligation以及圖菌後. 隔天長出colony. 挑單一colony做cloning PCR. 檢測是否目標基因有接進vector中. 而我遇到的情況是cloning PCR檢測有看到目標基因被放大. 而我將該菌珠培養O/N後 隔天抽plasmid. 再做enzyme di
(還有41個字)
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