Re: [方法] ligation的問題...

看板Biotech作者 (tRoMboNe pLaYer)時間15年前 (2008/09/15 01:48), 編輯推噓1(1推 0噓 0→)
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※ 引述《dreamysky (新綠園說不關了)》之銘言： : 我有一段要接進去的gene 大小約1K : 可是他的前後接位都是EcoR1 : vector 我有加CIAP 作用 37度 30 min : ligation volume控制在20 ul : mol為 Vector: 0.7 pmol : gene : 6 pmol : 2 unit T4 ligase (genemark) : 可是接不進去... : 有請先進幫幫我... : 我已經失敗兩週了... : PLEASE 1.基本上 有人說 vector : insert = 1:3 這可能要測過DNA濃度來判斷, 但是一般而言,ligation前,我會跑一張電泳, 確定vector以及insert的亮度, 然後再決定他們的比例, 2. ligation能不能成功,有很多關鍵, Restriction enzyme 有沒有切動很重要, 而RE有沒有切動,又與plasmid乾不乾淨有關係, 所以我想你如果要找出問題的話,必須step by step 每一步都做好,不然要成功,還有段距離呢.. 加油^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.173.205.20
推
09/15 13:53, , 1F
THX~
09/15 13:53, 1F
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文章代碼(AID): #18pKw7qd (Biotech)
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