Re: [方法] ligation的問題...

看板Biotech作者dreamysky (新綠園說不關了)時間15年前 (2008/09/15 01:01)推噓2(2推 0噓 3→)

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※ 引述《dreamysky (新綠園說不關了)》之銘言： : 標題: [方法] ligation的問題... : 時間: Sat Sep 13 16:24:28 2008 : : 我有一段要接進去的gene 大小約1K : : 可是他的前後接位都是EcoR1 : : vector 我有加CIAP 作用 37度 30 min : : ligation volume控制在20 ul : : mol為 Vector: 0.7 pmol : gene : 6 pmol : : 2 unit T4 ligase (genemark) : -- : ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) : ◆ From: 192.192.90.35 : 推 enisx:我都做5 uL而耶... 16 度 overnight 09/13 16:39 : 推 dankai:試試看overnight! 還有genemark的ligase我認為效率不太高~ 09/13 16:50 : → dankai:跟promega比起來~我比較喜歡用promega~~呵! 09/13 16:51 : 推 veltine:看看ligation buffer有沒有沉澱…另外加ATP試試看… 09/13 17:21 : 推 feng760804:OVERNIGHT+1 09/13 23:54 : 推 ookubo:請問一下你的接不進去是怎樣判定的？ 09/13 23:59 我是做四度C O/N 不是PCR 產物是從A vector 切下來接到B vector 因為濃度的關係我沒辦法做到E大說的5 ul 我比較擔心的是ATP 要怎麼回溫比較不會degrade? 我是拿一部分來做BamH1 & Nde1 digestion判定有沒有接進去有沒有接進去有1K的差距至於是順接還是反接我會用Sac1來判定我今天看了一下好像有兩個colonies有接進去明天做進一步確認此外我也會確認一下ATP跟溫度可能之後會做16度 O/N 謝謝各位前輩指教 -- 如果你喜歡懷念[味全龍] 請光臨Dragons 如果你也是喜歡["老洋基迷"] 請光臨NY-Yankees 如果你喜歡我的[文筆] 請光臨http://blog.yam.com/dreamyskyblue -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.90.35

推

yaliu

09/15 01:08, , 1^F

09/15 01:08, 1^F

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yaliu

09/15 01:09, , 2^F

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推

dankai

09/15 14:12, , 3^F

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