Re: [求救] 抽DNA跟跑電泳的問題
※ 引述《hsin1106 (過於喧囂的孤獨)》之銘言：
: 最近剛進實驗室開始做實驗
: 在抽DNA跑agarose gel時碰到了幾個問題
: 1.我的gel照UV的時候 頂端會整個偏白色
: 比較上面的band會被蓋過去 不容易判讀
前面推文已經說過改內染 我們家是習慣外染
也比較不會汙染電泳槽
: 2.用BamH和NdeI切我的plasmid時
: 我的比例是 兩種酵素 各加1μl
: DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer
: DNA量比較多的話就等比例增加
: 之後再37度下反應兩個小時
: 可是跑完電泳 甚麼都看不到
: (marker跟未切拿來當control的都有band)
我習慣酵素的量不超過總體積的十分之一
因為裡面有含甘油 太多可能會影響作用
而且你的DNA量也不多 不需要加那麼多的酵素
挺浪費的
: 3.我的plasmid 是pET-15b
: 通常在菌液OD=1.5上下時用VIOGENE的kit抽
: 抽出來的DNA稀釋10倍測260nm大概都在0.03~0.05之間
: 這樣的量是不是偏少?? 是的話 有哪些可能會影響??
我之前在作蛋白表現前使用pET-30a當載體 那時要先確定質體是OK的
所以我把質體送入DH5a菌種複製 發現抽出的質體DNA量很低
幾乎電泳圖上快看不見了 只有很淡的band
後來轉到BL21菌種後就沒問題了 所以轉菌的菌種適不適合你的質體也會有影響
我看你也是用pET 那你是轉到甚麼菌種呢?
你的膠圖也許要看仔細一點 搞不好其實有band 只是你沒注意到
: 麻煩板上的各位 提供可能的原因
: 或者有哪些資料可以參考的
: 讓我可以試著排除問題
: 不然實驗一整個沒辦法繼續下去
: 先謝謝各位了
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