[求救] 抽DNA跟跑電泳的問題

看板Biotech作者 (過於喧囂的孤獨)時間15年前 (2008/09/11 18:56), 編輯推噓6(6推 0噓 11→)
留言17則, 7人參與, 5年前最新討論串1/4 (看更多)
最近剛進實驗室開始做實驗 在抽DNA跑agarose gel時碰到了幾個問題 1.我的gel照UV的時候 頂端會整個偏白色 比較上面的band會被蓋過去 不容易判讀 2.用BamH和NdeI切我的plasmid時 我的比例是 兩種酵素 各加1μl DNA 7μl 跟 1μl 10X 的buffer DNA量比較多的話就等比例增加 之後再37度下反應兩個小時 可是跑完電泳 甚麼都看不到 (marker跟未切拿來當control的都有band) 3.我的plasmid 是pET-15b 通常在菌液OD=1.5上下時用VIOGENE的kit抽 抽出來的DNA稀釋10倍測260nm大概都在0.03~0.05之間 這樣的量是不是偏少?? 是的話 有哪些可能會影響?? 麻煩板上的各位 提供可能的原因 或者有哪些資料可以參考的 讓我可以試著排除問題 不然實驗一整個沒辦法繼續下去 先謝謝各位了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.177.142 ※ 編輯: hsin1106 來自: 163.15.177.142 (09/11 18:56)
推
09/11 19:59, , 1F
你的EtBr是內加在膠裡面的嗎~如果是改成外染的!那個上端偏
09/11 19:59, 1F
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09/11 20:00, , 2F
白的情形會改善掉~~
09/11 20:00, 2F
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09/11 20:05, , 3F
我的是內染的 下次試試看
09/11 20:05, 3F
推
09/11 20:07, , 4F
之前有討論過這一類問題~~所以你可以試爬文看看!!
09/11 20:07, 4F
推
09/11 20:17, , 5F
1. 內染的好像很容易這樣 沒被法外染就退一下色吧
09/11 20:17, 5F
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09/11 20:18, , 6F
2 切過頭?你有protocol建議的量或是有其他人的condition?
09/11 20:18, 6F
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09/11 20:19, , 7F
3. 應該算滿少的吧@@!你的總體積是多少?
09/11 20:19, 7F
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09/11 20:34, , 8F
1.請問退染的方式是?
09/11 20:34, 8F
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09/11 20:38, , 9F
2.用的量是之前學長姐做過後給的
09/11 20:38, 9F
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09/11 20:38, , 10F
有可能是因為我抽到的量比他們少 所以切過頭嗎？？
09/11 20:38, 10F
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09/11 20:40, , 11F
3.抽完後的總體積是50μl，我通常是取2ml的菌液
09/11 20:40, 11F
推
09/11 23:12, , 12F
退染泡水就好了 直接加EtBr的確也比較容易上面白白的
09/11 23:12, 12F
推
09/12 08:58, , 13F
第一個情形也有可能是EtBr放太久了XD 我們也是用內染
09/12 08:58, 13F
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09/12 08:58, , 14F
之前那一瓶N年買的就會這樣 買新的就不再出現
09/12 08:58, 14F
推
09/13 23:45, , 15F
在倒進製膠盒時記得用tip稍微"拉"一下看看
09/13 23:45, 15F
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11/11 00:58, , 16F
退染泡水就好了 直 https://muxiv.com
11/11 00:58, 16F
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01/03 16:44, 5年前 , 17F
2 切過頭?你有pro https://muxiv.com
01/03 16:44, 17F
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