[求救] Co-IP
請問一下比較好的Co-IP lysis buffer使用什麼比較好
現在我就是用普通的lysis buffer (Tris, NaCl, EDTA, 10%glyceral, 還有一堆inhibitor)
可是做出來效果不是很好
想說會部會我的lysis buffer太強了 (我似乎有看到有人用tritonX-100做)
把pt-pt interaction也都打破了
我的做法如下:
1. 3x 10^7 cells lyzed in 500 ul lysis buffer, 4C, rock for 45 min
2. Spin down 20 min
3. sup preclean with Trueblot anti Rabbit beads 30 min
4. Add 5 ug of primary Ab, 4C rock O/N
5. add 50 ul beads 1hr, rock , 4C
6. wash twice,
7. add 2 X loading buffer , heat 10 min
8. spindown, loading
hmm.....大概就是這個樣子
請問Co-IP達人
有沒有比較好的建議??
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 75.185.92.118
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03/23 22:36, , 1F
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