Re: [問題]關於膜蛋白的萃取
※ 引述《silverberry (走不開....)》之銘言：
: ※ 引述《Nikio (工作有夠忙)》之銘言：
: : 我也在做膜蛋白的純化實驗
: : 用的是古早方法....打破細胞後做超高速離心
: : 最後離下來有點透明的就是membrane fraction了
: 我們也是用這種方法~~
: 超高速離心是 120000g 60 min
: : 不過有個小問題：
: : 就是membrane fraction好像蠻難resuspense的耶
: : 我用的lysis buffer是TBS+1% triton X-100，後來用到2%也有些溶不掉
: : 請問版上有人做過類似實驗嗎？最後membrane fraction是用哪種東西溶掉的，感恩><
: 不知道你用 lysis buffer resuspension 都讓它做用多久??
: 我們家是用 Dodecyl-beta-maltoside(DDM) 或是 Octylglucoside(OG)
: (比較常用還是 DDM 因為它的 CMC 比較小~~)
: resuspension membrane 以後放在 shaker 上搖 overnight
: 隔天再用 50000g 30 min 去除沉澱
: 理論上沉澱就是 lipid 或是一些沒有被 suspension 出來的膜蛋白
: 不過我覺得關鍵還是在於使用的 detergent 的濃度是不是足夠了~~
: 然後之前有 sales 知道我們家有在做膜蛋白 然後就推薦我們用 PIERCE 的 kit
: http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=06010422
: 可是因為我們家的系統不適用 所以就放棄了 (當然價格也是一個考量啦~)
: 和大家分享~~ 不知道是不是合適~~
就你的case而言可加大萃取體積也可增加萃取效果
至於萃取時所需的detergent的決定完全要看你的後續實驗目的常用的是TX100
因為它是較溫和的不會造成蛋白變性
如果你只是要做定量實驗的話就無須考慮太多具電荷的detergent也可以用而且效果不錯
如salkosyl
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