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討論串[問題]關於膜蛋白的萃取
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#6
Re: [問題]關於膜蛋白的萃取
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者mengshiunn (salmonella)時間18年前 (2007/12/20 14:07), 編輯資訊
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就你的case而言可加大萃取體積也可增加萃取效果. 至於萃取時所需的detergent的決定完全要看你的後續實驗目的常用的是TX100. 因為它是較溫和的不會造成蛋白變性. 如果你只是要做定量實驗的話就無須考慮太多具電荷的detergent也可以用而且效果不錯如salkosyl. --. ※ 發信站
#5
Re: [問題]關於膜蛋白的萃取
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者silverberry (走不開....)時間18年前 (2007/12/05 23:25), 編輯資訊
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我們也是用這種方法~~. 超高速離心是 120000g 60 min. 不知道你用 lysis buffer resuspension 都讓它做用多久??. 我們家是用 Dodecyl-beta-maltoside(DDM) 或是 Octylglucoside(OG). (比較常用還是 DDM 因為
(還有336個字)
#4
Re: [問題]關於膜蛋白的萃取
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Nikio (工作有夠忙)時間18年前 (2007/12/05 20:38), 編輯資訊
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我也在做膜蛋白的純化實驗. 用的是古早方法....打破細胞後做超高速離心. 最後離下來有點透明的就是membrane fraction了. 不過有個小問題：. 就是membrane fraction好像蠻難resuspense的耶. 我用的lysis buffer是TBS+1% triton X-1
#3
Re: [問題]關於膜蛋白的萃取
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者belady (白衣天使黑心肝)時間18年前 (2007/08/11 19:00), 編輯資訊
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目前我正在作這方面的實驗. 但材料是原核生物Gram negative bacteria. 方法是先破菌（ultrasonication, fresh pression我都做過）. 所得的crude protein在利用 ultracentrifuge進行萃取. 所得產物及為膜蛋白（進行SDS pa
#2
Re: [問題]關於膜蛋白的萃取
推噓0(0推 0噓 1→)留言1則，0人參與, 最新作者vancent (新的鄉民XD)時間18年前 (2007/08/11 17:37), 編輯資訊
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homemade的話~. 你可以查查protein fractionation. 不過這只是個粗略的萃取方法. 你如果要很精細的話. 可以考慮梯度密度離心~像是用CsCl去做. 會比較純. 我也剛做完這部份的實驗xdddddddddddd. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆
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