[求救] 接好的plasmid切不出小片段來
從九月開始就在作構築質體的動作
老師要我用 PCR 夾出 insert 片段
clone 到 pET32c 上面後 transform 到大腸桿菌裡面去做表現
我 transform 完後在 LA plate 上有長出菌落
我以為這樣就表示有接到? 因為之前曾經長不出菌落過
然後挑菌落轉養後抽質體確認
用與 digest 時相同的酵素 HindIII & NdeI 來切
37度C 反應 2小時15分鐘
跑電泳卻沒有看到理論上一大一小的片段
(我的小片段應該是 500 bp 左右)
已經重複五六次了都沒有看到小片段
請問這表示我根本從頭到尾都沒接到嗎?
我看精華區有人說用兩種酵素的話要分一前一後處理
我是兩種酵素一起加下去
會是這個原因所以切不出來嗎?
還是有其他的問題?
先謝謝大家了(跪)
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