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討論串[求救] 接好的plasmid切不出小片段來
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Re: [求救] 接好的plasmid切不出小片段來
推噓3(3推 0噓 2→)留言5則，0人參與, 最新作者meiosisLin (吽爸)時間18年前 (2007/11/30 23:55), 編輯資訊
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給妳另一種測試的方式. 舉例：先準備兩種菌種. 一個是妳Ligase inasrt之後的菌.... 一個是直接transformation 空plasmid的菌. 在有insert的disc中取20個clone. 沒有insert的dice挑一顆 clone（就是plasmid only的菌） 做N
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#2
Re: [求救] 接好的plasmid切不出小片段來
推噓5(5推 0噓 3→)留言8則，0人參與, 最新作者bluecsky (我要藍藍淡淡的天空)時間18年前 (2007/11/30 16:06), 編輯資訊
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阿..都重覆了5 6次了... 而且你digest的時間都這麼長了. 不應該有切不出來的現象(除非你enzyme加真的很少很少..應該不可能吧). 就相信他吧..乖乖去重新ligation一批吧... 有長不一定是你有接好轉進去. 很多時候都是false positive... 假如你之前的都沒長c
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#1
[求救] 接好的plasmid切不出小片段來
推噓3(3推 0噓 0→)留言3則，0人參與, 最新作者foureyes時間18年前 (2007/11/30 15:01), 編輯資訊
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從九月開始就在作構築質體的動作. 老師要我用 PCR 夾出 insert 片段. clone 到 pET32c 上面後 transform 到大腸桿菌裡面去做表現. 我 transform 完後在 LA plate 上有長出菌落. 我以為這樣就表示有接到? 因為之前曾經長不出菌落過. 然後挑菌落轉養
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