Re: [求救] 想請教immunofluorescence的一些操作問題
大大您好，最近也在做這個實驗
過程中也碰到許多問題 有些也與您相似!
例如:我對於固定液的使用有許多的疑慮~
就我所知~固定液常用的有三種
1. -20度C 100% MeOH
2. acetone
3. 4% Paraformaldehyde
但對於要選用何種固定液實在很難抉擇
我有試著測試1&3的方法
但似乎很難從染色結果中推論誰好誰壞!
若要從顯微鏡下觀察細胞型態 卻沒有太大差異
請問以各位大大的經驗 該如何選擇呢?(Paper似乎也沒特定用者)
而我想看的蛋白是細胞膜上的receptor
另外好像許多人會將blocking buffer 或是抗體用PBST配置
但我有個顧慮是Tween-20或是tritonX-100
是不是會破壞我主要觀察的membrane protein?
因此我permeablizing改用0.5% saponin 抗體則配置在PBS中~
請問我這樣的顧慮是有必要的嗎~?
麻煩各位大大指教!!
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