Re: [求救] 想請教immunofluorescence的一些操作問題
※ 引述《Seal13.bbs@ptt.cc (腦殘中...)》之銘言：
> 如果是一般的immunostain
> 我們做的方式大概是:
> 例如使用貼附性的細胞
> 1. 準備3cm culture dish
> (或是12well盤也差不多只要可以容cover slide即可)
> 和蓋玻片cover slide (小小正方形那種)
蓋玻片比較正確的說法是 cover slip 或是 cover glass
slide 原則上是"載"玻片限定
雖然有時候有人會混用 但是出現在 paper 上的 slide 基本上還是載玻片而已
※ 引述《tsubasawolfy.bbs@ptt.cc (悠久の翼)》之銘言：
> 看了兩篇怎麼都跟我用的不一樣Orz
> 我是用之前那篇說過的Chamber slide (也只用過這種(￣ー￣；))
就用跟不用 chamber slide 的差別而已
chamber slide 一片滿貴的 而且不是沒有它的缺點
所以有些人還是比較喜歡傳統的蓋玻片養法
> 1.前處理就跟sub culture一樣打下來接下來就算好細胞量然後dilute到1000uL的
> medium中(chamber每個well 1.5ml就會滿出來)
> 然後就種到每個well中 我用的chamber最多4 well
> 2.等細胞貼附後就看實驗條件在well裡面進行處理
> 3.接下來抽掉medium再用PBS wash兩次後進行fix
> 4.fix溶液是用50% Acetone/ 50% methanol 每well 500uL 處理三分鐘後抽掉
> 用PBS wash 兩次
> (Acetone+methanol好像是固定組織用的 那時候是參照一本Antibody的textbook
> 上面immunofluorescence protocol章節提供的各種固定配方試出來最合我意的)
用有機溶劑 fix 應該是比較適合 cytoskeleton
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And my soul from out that shadow that lies floating on the floor
在那地板上浮動的影子中的我的靈魂
Shall be lifted- nevermore!
將永不再起...
--The Raven by E.A.Poe
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※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: 192.5.109.49
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