[問題] pull-down與IP的討論
各位版友大家好
現在我正在進行IP 期待利用A protein 的Ab
可以將A protein precipitate的同時
也將跟他作用的B protein precipitate下來
A與B protein之前利用GST-B protein與purified A protein
進行pull-down以後 發現的確是有direct interaction
但是剛剛利用IP卻發現他們之間沒有interaction?
怪哉
不知道版友會怎麼解釋這個問題?
我現在在猜想
1. 是否我的lysis buffer中含有太高濃度的detergen(2.5% CHAPS)
導致干擾了A-B interaction?
2. 我還沒wash 光是在cell lysate剛load進去 離心以後就掉了
因此我想不會是wash的問題 所以直接想說是binding的條件不對?
因為我是用PIERCE的seize X protein A immunoprecipitation kit做的
接下來會想先降低我的detergen濃度再試一次
假如各位版友看到這樣的結果 會怎麼解釋?
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