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討論串[問題] pull-down與IP的討論
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#1
[問題] pull-down與IP的討論
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Bluecold (黑特版比就可版好笑)時間17年前 (2007/05/24 17:34), 編輯資訊
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各位版友大家好. 現在我正在進行IP 期待利用A protein 的Ab. 可以將A protein precipitate的同時. 也將跟他作用的B protein precipitate下來. A與B protein之前利用GST-B protein與purified A protein. 進行
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#2
Re: [問題] pull-down與IP的討論
推噓2(2推 0噓 1→)留言3則，0人參與, 最新作者ColdP (......)時間17年前 (2007/05/25 06:53), 編輯資訊
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其實IP，GST-pull down，yeast-two hybrid作出的結果不一致其實還滿常見的，. 因為他們三個的實驗condition本質上有著滿大的不同.... 要注意的是，. 在GST-pull down裡面，. 你的A protein和B protein的"量"相較於"正常情況"下，.
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#3
Re: [問題] pull-down與IP的討論
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Bluecold (黑特版比就可版好笑)時間17年前 (2007/05/25 20:53), 編輯資訊
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謝謝這位版友的回答. 看了之後才發現我把實驗想得簡單了..... 不過有些問題希望可以跟大家討論一下. 關於濃度的問題 我有考慮過. 但是在進行GST-pull-down時 利用wash buffer wash的過程中. 不知道能不能視為一種dilute 假若可以的話. 那麼基本上GST pull-
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#4
Re: [問題] pull-down與IP的討論
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者liuse (充實自己，提昇自己)時間17年前 (2007/05/26 01:05), 編輯資訊
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基本上，in vitro pull down assay是很可信的. 其結果下的結論"A protein can interact with B in vitro". A和B在structure上有可以互相interact的region(這邊大家都會搞一堆deletion clone. 去narro
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