Re: [問題] PCR, Tm值差很多的primer
※ 引述《Porkcan.bbs@ptt.cc (Threatening)》之銘言：
> ───────────────────────────────────────
> 手上有一組primer
> annealing temperature最佳是60度啦
> 不過有試過到40度也可以做的出來
> 我想要拿其中的Forward或是Reverse primer來跟oligo d(T)配成一對進行PCR
> 但是Oligo d(T)的溫度似乎很低 25度?
> 不知道這樣兩個primer之間的Tm值相差這麼多
> PCR要怎麼去調整
> ps有做過gradient PCR, 大概從35~45度, 不過沒有product
> 還是就直接把Tm降到25度配合oligo d(T)勒？
請問你的oligo dT是幾mer的呢?
我也有利用15 mer 的oligo dT加一個forward pirmer,用Tm = 45度跑~~
跑出來的比37度還好!!
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