Re: [問題] PCR, Tm值差很多的primer
※ 引述《Porkcan (Threatening)》之銘言：
有種PCR方法是分開做
先用一條Primer做出單股
再加入另一條Primer繼續跑另一組Cycle
做出另外一股
這樣就可以設定個別最佳的Tm囉
不然就把Tm低的primer序列延伸
看能不能多弄幾個GC
: 手上有一組primer
: annealing temperature最佳是60度啦
: 不過有試過到40度也可以做的出來
: 我想要拿其中的Forward或是Reverse primer來跟oligo d(T)配成一對進行PCR
: 但是Oligo d(T)的溫度似乎很低 25度?
這樣在Elongation的溫度下
Oligo d(T)不會飛走嗎？ @@"
: 不知道這樣兩個primer之間的Tm值相差這麼多
: PCR要怎麼去調整
: ps有做過gradient PCR, 大概從35~45度, 不過沒有product
: 還是就直接把Tm降到25度配合oligo d(T)勒？
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