[問題] PCR, Tm值差很多的primer
手上有一組primer
annealing temperature最佳是60度啦
不過有試過到40度也可以做的出來
我想要拿其中的Forward或是Reverse primer來跟oligo d(T)配成一對進行PCR
但是Oligo d(T)的溫度似乎很低 25度?
不知道這樣兩個primer之間的Tm值相差這麼多
PCR要怎麼去調整
ps有做過gradient PCR, 大概從35~45度, 不過沒有product
還是就直接把Tm降到25度配合oligo d(T)勒?
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