Re: [問題] 製作SDS-PAGE時會漏膠
※ 引述《biolenz (冷次)》之銘言：
: ※ 引述《GLNVA (自游自在)》之銘言：
: : 喝 我們實驗室也是碰過這問題，我碩一的時候怎麼作怎麼美，到了碩二不知道怎麼了
: : 趕data它拼命就給我漏，漏的挺嚴重的！我也用過paraffin，也換過新的玻璃(Bio-Rad
: : 原廠的喔)都沒辦法撐很久，後來找廠商來，
: 我也是用 Bio-Rad 的，型號 Mini PROTEAN 3 cell (小片膠)
: 我覺得架子跟玻璃還有墊子應該都沒什麼問題 (那兩片灰色的墊子要一兩千XDD)
: 因為漏膠的那組用一樣的東西重作會 ok，而且漏膠是有時候會漏，有時候
: 不會，我在想是不是是膠本身的問題，前面有板友提到 load 水進去不會漏
: ，load 膠偏會漏 (明明膠就比水還黏稠，沒道理阿)。
: 因為漏的情形大部分是配 separating gel 的時候，用 isobutanol 壓會有
: 一邊垮下去，看起來好像是漏掉了，可是看那個墊子又沒有東西漏出來的樣
: 子。有沒有可能是膠凝固的不均勻所導致的呢？(大片的膠尤其容易這樣)
: 我之後把膠配好在 load 膠前一定會把他攪拌均勻 (可以用個燒杯放 stirr)
: 這樣子看起來漏膠的情形就少了許多。
: 不過我也不確定就是了，有時候運氣好怎麼亂作的膠都好好的，有時候運氣背
: 做出來的膠就鳥掉.....orz
有沒有考慮用最原始的方法?
看了版友們的回文
發現大家都是用鑄膠模
所以都會有型號的問題產生
況且有些海綿啊 膠墊啊 好像過一段時間就會壞掉的樣子
我老闆因為覺得鑄膠模不好用
所以我們實驗室都用比較克難的方法
提供給你參考一下
首先把spacer跟兩片玻璃擺好 然後下面貼膠帶
膠帶要貼在玻璃上 貼的紮實一點
相同的 spacer的兩側也要貼 一樣也是貼的紮實一點
注意膠帶要用寬的那一種 不要用細的
全部貼完以後 用長尾夾夾起來
擺個一個小時以上 讓膠帶上面的有機溶劑揮發
這樣水才不會破壞膠帶的黏性
這樣一來應該是不會漏
我現在這樣做膠 load進去多少就凝固多少
上面用水去壓會比較快凝固
如果真的擔心會漏的話
那麼膠帶就只黏下面就好 然後用濃度低的agarose
大概load個300-200ul 讓agarose均勻的分布在底部
這樣就可以了 不過這樣一來的話
可能會有一些agarose滲到spacer 跟 玻璃的中間
造成有些well可能會滲
如果用卡馬西 blue染的話就沒有什麼差
但是要是做western的話 可能就會影響到
如果上述的方法都還是會漏的話
那麼還有幾招 我老闆教的......
1. 改運吧 可能是八字太輕 會做不出來
要不然就......
2. 拿著你的pipetman 用20P的就好了
裝滿著TEMED 看到哪裡漏就給他滴下去.....
老闆說這是不傳密技 請各位別聲張出去 拜託XD
他上個禮拜教我的 我用過一次 真是好用
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.32.9
※ 編輯: Bluecold 來自: 140.109.32.9 (07/09 15:52)
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