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作者 Ianthegood 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共1561則
限定看板:Biotech
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4F→: 你這個如果是double labelled的最好看過起碼20篇文獻06/08 18:20
5F→: 再動手06/08 18:20
7F推: 本來就不會是線性吧 而且好像也沒人真的fit log的方程05/20 15:37
8F→: 式都馬挑兩個點內插05/20 15:37
10F推: 會在那個ball park啊 需要那麼精準定量你就打MS或AAA05/20 21:56
11F→: 吧05/20 21:56
12F→: 挑最近的兩個點一上一下 差也不會差到看不到整體的tre05/20 21:58
13F→: nd05/20 21:58
16F推: 啊你就用log去fit啊 也沒差05/27 17:08
1F→: 嗯 為什麼真的不重要 你有抗體壓western嗎?05/25 17:28
2F→: loading control做好 勉強可以說是overexpression05/25 17:28
3F→: 然後你marker沒標誰知道15k那坨是哪坨05/25 17:29
8F推: sds-page不是什麼高科技,尤其是自己配的tris based,05/25 18:24
9F→: 沒有太多可以調整的地方, 如果你的host就是會有自己05/25 18:24
10F→: 的蛋白在那個size那1D的PAGE就是沒辦法分開來。壓west05/25 18:24
11F→: ern吧05/25 18:24
12F→: 然後標marker的意思是在marker旁邊標上代表的mw 不要05/25 18:25
13F→: 影響到膠本身的呈現05/25 18:25
5F推: 這是作業所以是不用背的吧 樓上很激動XD05/15 17:34
6F推: 我覺得關鍵在這幾個strain的差異 bl21是沒有內建T7的05/15 17:36
7F→: star其實是商標這個不太好 type是BL21DE3 內建T7 ros05/15 17:36
8F→: etta則是codon optimised for eukaryotic gene05/15 17:36
9F→: 所以control的band要嘛是leaky expression要嘛是size05/15 17:37
10F→: 很像的其他protein05/15 17:37
11F→: 看起來只有de3真的有被induce 推理plasmid backbone是05/15 17:38
12F→: iptg推的T7 promoter05/15 17:38
13F→: 然後loading control滿糟的 很難比較不同lane之間05/15 17:39
14F推: 所以也有可能是de3完全沒有被induce 看到的差異只是lo05/15 17:42
15F→: ading不同 然後要嘛是iptg完全沒有作用因為promoter05/15 17:42
16F→: 不是t7 或是全部都被推到inclusion body或是被degrade05/15 17:42
17F→: 掉了05/15 17:42
18F推: 好你可以設計實驗測試這些了05/15 17:43
27F→: 怎麼樣都是先抽個mini送定序吧...05/18 22:57
1F→: 有看到上面有一個tab寫help & docs嗎? 那個點下去05/14 22:52
5F→: 是沒有圖說膩05/14 18:47
11F推: 做 都做05/14 03:14
16F→: dapi其實不用fix 多加一點就好05/03 01:56
17F→: 你看起來好像也沒有一定得做mito+phal的colocalisatio05/03 01:58
18F→: n 就分開做唄?05/03 01:58
20F→: 可以喔 就加 但是那批大概會被毒死XD05/03 16:06
24F推: 樓上是對的, 有hoechst就用, 沒有又買不到急用可以試d05/07 23:09
25F→: api. 高濃度染到一個小時看看05/07 23:09
27F→: 活染的意思就是不要下pfa直接下hoechst跟mito05/08 03:12
1F推: 建議你跑完膠後染 跑native 然後如果有比etbr更強的就05/01 01:09
2F→: 用下去05/01 01:09
3F→: nanodrop常常很騙 跑膠才是真的 或是qubit05/01 01:10
4F→: trizol下去後要vortex一下 看不到中間層就是量很少而05/01 01:10
5F→: 已05/01 01:11
8F→: 對了最後要沈澱比較好喔05/01 15:59
4F推: 或甚至是兩個綜合 上一管iptg掛了所以你一直都用比較04/29 21:39
5F→: 低的濃度在induce 新一管濃度對了就把蛋白全部推到ib04/29 21:39
6F→: 裡面XD04/29 21:39
9F→: 自己養屎汁也養好一陣子了該碰到的都碰過了XD04/30 19:30
12F→: 表現太好啊 降低iptg試看看04/30 23:37