[求救] 關於SDS-PAGE的問題

看板Biotech作者 (pinkyuyu)時間5年前 (2019/05/25 16:40), 編輯推噓5(5推 0噓 25→)
留言30則, 11人參與, 5年前最新討論串1/1
想知道為什麼跑出來的sample都會在15k附近會有一坨濃濃的band? 剛好又與要看的蛋白質大小會重疊到,該怎麼把那一坨band分離開來呢？還是破菌使用的b uffer也會有影響呢？ 菌種使用BL21(DE3)plyss Gel不論使用12%或15%都會有這種狀況QQ https://i.imgur.com/r1TQZXH.jpg
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05/25 17:28, 5年前 , 1F
嗯 為什麼真的不重要 你有抗體壓western嗎?
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loading control做好 勉強可以說是overexpression
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05/25 17:29, 5年前 , 3F
然後你marker沒標誰知道15k那坨是哪坨
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紅色畫起來那一坨
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！可是負控也是這樣，但我看paper上面的結果圖都沒有
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這樣一坨然後就看到表現蛋白了！想說是不是沒跑好擠
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成一坨才看不到
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推
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sds-page不是什麼高科技,尤其是自己配的tris based,
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沒有太多可以調整的地方, 如果你的host就是會有自己
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的蛋白在那個size那1D的PAGE就是沒辦法分開來。壓west
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ern吧
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然後標marker的意思是在marker旁邊標上代表的mw 不要
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影響到膠本身的呈現
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推
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有加lysozyme 嗎
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05/26 22:34, 5年前 , 15F
真的想要分更開，可以考慮調膠的%，有一種gradient%的膠可
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以買(pre-cast)。或者是跑更大張的膠
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05/26 22:37, 5年前 , 17F
但如果真的完全重疊，跑再開也沒用。反正要做Western對吧?
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推
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Upper Gel 多跑些
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05/27 16:45, 5年前 , 19F
看paper上面的結果圖都沒有..你確定材料跟paper完全一樣?
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05/27 16:47, 5年前 , 20F
該不會paper的結果圖其實是western吧XDDD
05/27 16:47, 20F
推
05/28 23:01, 5年前 , 21F
什麼都沒標很難幫 induce 前後有沒有差異？ 萬一大小
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05/28 23:01, 5年前 , 22F
差不多,有沒有抗體可以做western?
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05/29 09:35, 5年前 , 23F
你要比較誘導前誘導後的band 還有沒有plasmid的菌的band
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05/29 09:36, 5年前 , 24F
那應該菌本身的蛋白質,你要分開就是純化你的蛋白
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05/29 09:37, 5年前 , 25F
不然就是像前面說的western 用抗體染
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06/02 15:08, 5年前 , 26F
可以改另一個應該是tricine的buffer system 解析力會大增
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06/02 15:08, 5年前 , 27F
如果實在沒有抗體的話 然後再改下膠的趴數 使你要的位置可
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06/02 15:08, 5年前 , 28F
以拉的比較開
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06/13 02:05, 5年前 , 29F
蛋白質濃度好像有點高？well裡好像還卡很多
06/13 02:05, 29F
推
06/14 08:16, 5年前 , 30F
跑2D
06/14 08:16, 30F
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